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NOLC1蛋白是一个高度磷酸化的哺乳动物蛋白,既参与核仁的发生和rDNA的转录,又参与炎症发生、细胞生长、细胞凋亡、肿瘤发生等相关信号通路的调控。已有研究报道,在鼻咽癌和肝癌的发生发展中,NOLC1起着至关重要的作用。但是,关于NOLC1蛋白在肺癌细胞中的作用还未有报道。本实验首先通过TOPO克隆法成功构建入门载体pENTR/D-TOPO-NOLC1,利用通路克隆系统技术成功构建pAd-CMV-V5-NOLC1表达载体,成功包装成腺病毒后,qRT-PCR和Western blot分别比较不同(5-100)MOIs的腺病毒感染A549细胞和HEL细胞后,两种细胞中NOLC1 mRNA量和蛋白量的表达情况。结果显示MOI=100时,两种细胞NOLC1的mRNA量和蛋白量最高,后续病毒感染实验均采用100MOI。MTT实验分析感染Ad-V5-NOLC1(过表达)和转染shRNA-NOLC1质粒(干扰)对HEL和A549细胞活力的影响,结果显示：NOLC1蛋白的过表达和干扰表达均促进A549细胞的活性降低,但是对HEL细胞影响很小。为确定细胞活性减少是由细胞凋亡引起还是由细胞坏死引起,采用AnnexinV-APC/PI双染法检测过表达或干扰NOLC1蛋白表达对HEL和A549细胞凋亡的影响,结果显示：二者均促进A549细胞凋亡,但是均对HEL细胞影响很小。进一步通过线粒体膜电位实验确定细胞凋亡是否伴随着线粒体膜电位的变化,结果显示：和HEL细胞相比,过表达NOLC1对A549细胞线粒体膜电位的下降较为显著。说明NOLC1过表达影响A549线粒体膜电位下降,可能导致促凋亡物质释放,继而激活caspase,最终使细胞凋亡。为确定细胞凋亡是否引起凋亡信号通路因子的变化,本实验通过Real-timePCR检测了Caspase家族(CASP3, CASP6, CASP7, CASP8)基因,TNF与受体家族(TNF, TNF10B)基因和BCL2家族(BCL2L11, BAX, BAG1, BCL2A1)基因的表达量,结果显示：在HEL细胞中,促凋亡基因,和对照组(Ad-V5)相比,实验组(Ad-V5-NOLC1)均出现1.0～2.0之间的上调,抗凋亡基因出现-4.0～2.0范围的下调。然而在A549细胞中,实验组和对照组相比,促凋亡基因出现4.0～8.0之间的上调,抗凋亡基因BCL2A1明显下调。过表达NOLC1明显上调了A549细胞中促凋亡基因的表达,下调了抗凋亡基因的表达,两种重要的促凋亡蛋白CASP8和BAX均显著上调。但是,在HEL细胞中促凋亡基因上调不明显,并且两种蛋白也无显著变化。这一结果支持了过表达NOLC1蛋白促进A549细胞凋亡,但是对正常的HEL细胞影响很小。本研究初步确定了过表达NOLC1蛋白对人肺腺癌细胞A549具有促凋亡作用,而对正常的人胚肺细胞HEL细胞影响很小,有望为研究NOLC1蛋白对A549细胞凋亡信号通路的具体作用机制奠定理论基础,为进一步在动物水平上研究NOLC1蛋白的过表达作用提供了实验基础。