研究背景肿瘤相关成纤维细胞（Cancer-associated fibroblasts,CAFs）是肿瘤微环境的重要组成成分,在肿瘤的发生和进展过程中起到关键作用。CAFs通过分泌多种蛋白质、生长因子和趋化因子,参与肿瘤细胞增殖、肿瘤免疫、肿瘤血管生成和细胞外基质重塑。瑞戈非尼（Regorafenib）属于多激酶抑制剂家族成员,其通过抑制c-KIT、RET、TIE2、PDGFR和FGFR等各种激酶的活性,能够直接抑制肿瘤的生长,也能够调节肿瘤间质和抑制肿瘤血管生成。研究目的Regorafenib是一种新型的口服多激酶抑制剂,能够有效靶向间质细胞,然而目前关于regorafenib对胃肠道CAFs的研究较少。因此,我们以胃肠道CAFs作为本次研究的重点,探究了 regorafenib对胃肠道CAFs的作用及其潜在的机制。研究方法首先,我们建立了 HCT116单独接种以及HCT116和MSC联合接种的皮下移植裸鼠肿瘤模型,用安慰剂/regorafenib对裸鼠进行治疗,检测regorafenib对间质细胞的影响在肿瘤治疗中的重要性。通过免疫组化染色、TUNEL和多重免疫荧光染色,分析regorafenib在体内对肿瘤增殖和凋亡的影响,包括regorafenib对间质细胞和肿瘤上皮细胞增殖和凋亡的作用。由于间质细胞和肿瘤局部巨噬细胞的浸润密切相关,因此免疫组化染色还研究了 regorafenib对间质细胞以及巨噬细胞浸润的影响。之后,我们用胃肠道肿瘤细胞系来源的外泌体处理间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）获得CAFs体外模型。采用MTS和流式细胞术检测regorafenib对体外胃肠道CAFs增殖和凋亡的影响。最后,探究了 regorafenib诱导CAFs凋亡的分子机制。通过Western blot检测了 regorafenib处理胃肠道CAFs后,细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平,以及AKT的表达和磷酸化水平的改变。研究结果在两个肿瘤模型中,regorafenib治疗前,HCT116和MSC联合接种组的肿瘤生长速度显著高于HCT116单独接种组。Regorafenib治疗抑制了体内肿瘤的生长,且对间质比例高的HCT116+MSC肿瘤治疗效果更显著。Regorafenib在体内能够抑制肿瘤增殖,诱导肿瘤凋亡,regorafenib能够同时靶向肿瘤细胞和间质细胞,减少增殖的间质细胞和肿瘤上皮细胞的数量,增加凋亡的间质细胞和肿瘤上皮细胞的数量。此外,regorafenib通过减少肿瘤组织中CAFs的比例从而影响巨噬细胞的浸润。体外实验结果表明,regorafenib对胃肠道CAFs具有增殖抑制、细胞周期阻滞以及诱导细胞凋亡的作用。Western blot结果表明,regorafenib处理胃肠道CAFs后,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调,Bax表达上调,并且胃肠道CAFs中AKT磷酸化通路被抑制。研究结论1.与肿瘤细胞单独接种组相比,肿瘤细胞与MSC联合接种组的间质比例显著提高。同时间质细胞比例增加,肿瘤的生长速度显著加快,这证实了 CAFs在促进肿瘤增殖方面的积极作用。Regorafenib具有抗肿瘤活性,且对间质细胞比例高的肿瘤疗效更显著,提示regorafenib对CAFs的杀伤作用在肿瘤治疗中发挥重要作用。2.Regorafenib通过减少肿瘤组织中CAFs 比例从而影响巨噬细胞的浸润。3.Regorafenib能够抑制胃肠道CAFs的增殖,诱导CAFs的凋亡,其诱导胃肠道CAFs凋亡的作用是通过抑制AKT的磷酸化通路。