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[目的]:使用蛋白质组学技术,探讨过表达肿瘤抑制基因CADM1以及IGF-1R阻滞剂PPP对人骨肉瘤U-2OS细胞株起抑癌作用的差异蛋白,为进一步蛋白质芯片制作、蛋白质间相互作用、新药设计的分子靶点研究提供实验基础。[方法]:实验分过表达CADM1组与转染空载体组和PPP实验组与对照组。1.过表达CADM1组与转染空载体组:取过表达CADM1的人骨肉瘤U-2OS-CADM1细胞株(课题组公开专利201510924952.7,中国典型培养物保藏中心保藏编号:CCTCC NO:C201518)及转染空载体人骨肉瘤U-2OS细胞株进行细胞复苏、扩增培养,提取细胞总蛋白,运用双向电泳技术鉴定出其中的差异蛋白,并查阅相关数据库和资料,进行对比分析。2.PPP实验组与对照组:取人骨肉瘤U-2OS细胞株进行细胞复苏、扩增培养,PPP组加入PPP 8.0μM(DMSO溶解),对照组加入等量DMSO,提取细胞总蛋白质,运用双向电泳技术鉴定出其中的差异蛋白,并进行质谱分析及查阅相关数据库和资料,进行对比分析。[结果]:1.过表达CADM1组与转染空载体组细胞总蛋白,重复3次进行双向电泳实验,实验有效分离了细胞总蛋白,凝胶图谱背景低,蛋白点清晰可见。双向电泳实验结果可见蛋白质点894±19个,与空载体对照株比较,U-2os-CADM1细胞株有23个蛋白点表达显著上调,21个蛋白点表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。实验选取了其中12个显著性差异表达的蛋白位点进行了质谱实验分析,其中被成功检测的蛋白位点有6个,分别是:乳酸脱氢酶B链(LDHB)、α-烯醇化酶(ENOA)、半乳糖激酶(GALK1)、Ⅱ型细胞骨架1角蛋白(K2C1)、人组氨酸磷酸酶蛋白(PHP14)、Ⅰ型细胞骨架9角蛋白(K1C9)。2.PPP实验组与对照组细胞总蛋白,重复3次进行双向电泳实验,有效分离了细胞总蛋白,凝胶图谱背景低,蛋白点清晰可见。双向电泳实验结果可见蛋白质点795±23个,与对照组比较,PPP组有25个蛋白点表达显著上调,30个蛋白点表达显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。实验选取了其中12个显著性差异表达的蛋白位点进行了质谱实验分析,其中被成功检测的蛋白位点有6个,分别是:巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、D型多巴色素脱羧酶(DDT)、Ⅱ型细胞骨架1角蛋白(K2C1)、可溶抗药性相关钙结合蛋白(SRI)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTP1)、黄素还原酶(BLVRB)。[结论]:1.实验成功运用双向电泳、质谱分析等蛋白质组学技术成功分离并鉴定:乳酸脱氢酶B链(LDHB)、α-烯醇化酶(ENOA)、半乳糖激酶(GALK1)、Ⅱ型细胞骨架1角蛋白(K2C1)、人组氨酸磷酸酶蛋白(PHP14)、Ⅰ型细胞骨架9角蛋白(K1C9)6种蛋白在过表达CADM1组表达显著差异,并检索相关文献进行分析。2.实验成功运用双向电泳、质谱分析等蛋白质组学技术成功分离并鉴定:巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、D型多巴色素脱羧酶(DDT)、Ⅱ型细胞骨架1角蛋白(K2C1)、可溶抗药性相关钙结合蛋白(SRI)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTP1)、黄素还原酶(BLVRB)6种蛋白在PPP实验组表达显著差异,并检索相关文献进行分析。3.本课题实验结果为进一步深入探讨过表达CADM1及IGF-1R阻滞剂PPP对骨肉瘤细胞株U-2OS的作用奠定了基础,可能为探讨骨肉瘤的发生、发展及治疗机制提供一个新的方向。