论文部分内容阅读
目的：通过建立高胆红素血症模型，模拟新生儿黄疸的表现，了解胆红素对脾细胞MyD88和p38MAPK蛋白表达及脾细胞凋亡的影响。方法：1造模:选用144只新生SD大鼠，随机分为生理盐水组(A)、脂多糖(LPS)组(B)、15mg/kg胆红素组(C)、不同剂量胆红素+LPS组(15 mg/kg、30mg/kg、50mg/kg)胆红素+LPS组，即D、E、F共6组，每组32只，每组又分成2,5,24h共3个时段组，每时段8只。建立模型：给予不同剂量胆红素颈静脉注射后1h采血，测定血浆胆红素浓度，确认模型复制成功；生理盐水组和LPS组静脉给予生理盐水(0.1ml)；2、胆红素或生理盐水注入1h后腹腔注入LPS1mg/kg;A组给予腹腔注入0.05μl生理盐水;3、腹腔注入LPS后不同时间点采血,测血浆胆红素水平;先后给予预冷的生理盐水和4％多聚甲醛心脏灌注做内固定后快速取脾脏,固定、脱水、透明、包埋制成石蜡标本,二步法测脾细胞MyD88及磷酸化p38MAPK的含量,TUNEL法测凋亡,PEMS3.1for windows数据软件建立不同剂量胆红素下的血浆总胆红素浓度-时间代谢曲线。结果：1、胆红素注入1h后,15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg胆红素组分别达到血浆总胆红素浓度95％的可信区间为:(106.31,123.49)μmol/L、(196.58,238.90)μmol/L和(325.15,349.07)μmol/L,且剂量和血浆总胆红素浓度有很好的等级相关性相关性(rs=0.9452);2、MyD88及磷酸化p38MAPK变化:(1)①当胆红素浓度达到(106.31,123.49)μmol/L范围时,胆红素单独作用可以刺激脾细胞 MyD88的表达,5h刺激作用较强(P<0.05),LPS的作用强于低浓度胆红素单独的刺激作用(P<0.01)。随体内代谢,作用消失;②当胆红素浓度达到(106.31,123.49)μmol/L范围时,胆红素对 LPS刺激 MyD88表达有协同作用,5h协同刺激作用较强(P<0.01);各时段与同时段的LPS组比,差异无统计学意义(P>0.01),随着时间延长,刺激作用消失;③当体内胆红素浓度达到(196.58,238.90)μmol/L范围时,胆红素对LPS刺激MyD88的表达有抑制作用,随着浓度的升高,胆红素的抑制作用增强,且抑制作用在浓度为(325.15,349.07)μmol/L范围时持续至24h仍存在。(2)①当胆红素浓度达到(106.31,123.49)μmol/L范围时,可以刺激脾细胞p38MAPK的磷酸化,p-p38MAPK表达增多,5h刺激作用2h较强(P<0.01),24h仍起作用;LPS的刺激作用强于低浓度胆红素单独的刺激作用(P<0.01),刺激作用可维持到24h;②当胆红素浓度达到(106.31,123.49)μmol/L范围时,LPS和胆红素共同作用下,刺激脾细胞p-p38MAPK表达,5h刺激作用较强(P<0.01);但15mg/kg和30mg/kg剂量胆红素+LPS组的2h、5h和24h时段组与相同时间点的LPS组比较,表达均少于同时间点脂多糖组(P<0.05)。表明，胆红素浓度达到(106.31,123.49)μmol/L时,开始对 LPS刺激脾细胞p-p38MAPK表达有抑制作用,且水平增加,抑制增强;当胆红素浓度达(325.15,349.07)μmol/L范围时,对脾细胞p-p38MAPK表达表现出较强的刺激作用,且刺激持续时间和强度较LPS作用明显(P<0.01)。表明,胆红素对p38MAPK磷酸化作用复杂;3、MyD88和p-p38MAPK与胆红素浓度的关系:三个时段胆红素浓度与MyD88IOD水平有较好直线负相关。胆红素越高,抑制脾细胞表达MyD88水平越显著;胆红素对 p-p38MAPK表达的影响复杂,随着胆红素浓度的升高,p-p38MAPK的表达有增加的趋势,且与胆红素作用时间有一定相关性。4、凋亡:① LPS组和15mg/kg组凋亡率大于空白组(P<0.01),表明LPS和低胆红素浓度可以激活凋亡信号;在胆红素浓度(106.31,123.49)μmol/L范围已表现出毒性作用;②50mg/kg胆红素+LPS组24h凋亡率高于LPS组(P<0.01);15mg/kg胆红素+LPS组和30mg/kg胆红素+LPS组凋亡率均低于 LPS组(P<0.01);15mg/kg胆红素+LPS组低于30mg/kg胆红素+LPS组(P<0.01)。表明,胆红素的高低与凋亡有关。提示,高浓度胆红素可以激活某些凋亡信号通路。结论：高浓度胆红素使脾细胞凋亡增多,MyD88的表达减少,p38MAPK的磷酸化增强;这些作用和浓度的直接相关。这种异常调节可能会持续存在。提示,在高胆红素血症病例中免疫功能的紊乱,可能与胆红素对免疫细胞TLRs信号通路中蛋白表达的异常调节及激活细胞凋亡信号通路有关。