青黛治疗DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的实验研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sdsdfe45
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目 的:通过研究青黛对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠炎症因子TNF-α、IL-6、TGF-β1、IL-10的表达情况及调亡因子Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白和mRNA表达情况的影响,探讨青黛对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及其机制。材料与方法:将60只健康雄性C57BL/6小鼠(体重20~24g),随机分为对照组20和造模组40只,造模组小鼠自由饮用5%DSS溶液7d诱导UC模型。造模成功后次日,将成模小鼠随机分为模型组和青黛组。对照组和模型组每日灌胃给予0.5%羟甲基纤维素钠,青黛组灌胃给予0.5%羟甲基纤维素钠制成的青黛混悬液,灌胃体积均为10mL/kg,连续10天。末次给药后禁食不禁水24h,摘眼球取血,处死全部小鼠。观察小鼠的一般状态;记录小鼠疾病活动指数(disease activity index,DAI);在光镜下观察小鼠结肠组织形态的变化;HE法染色观察小鼠结肠粘膜组织学改变;酶联免疫吸附试验检测TNF-α、IL-6、TGF-β1和IL-10的表达情况;原位末端标记法观察小鼠结肠组织中的细胞凋亡数量变化情况;蛋白免疫印迹和免疫组化技术检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达;实时聚合酶链反应法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA 的表达。结 果:1.小鼠一般情况及DAI评分:对照组小鼠被毛色白而有光华、反应迅捷、运动及饮食均正常、尿量基本无变化、无血便。模型组小鼠被毛干燥无光泽、精神萎颓、活动减少、不欲饮食、泄泻、出现黏液脓血便。青黛组小鼠的毛色,运动和饮食情况好于模型组。DAI评分结果显示,与对照组相比,模型组的DAI评分显著高于对对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,青黛组DAI评分显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。2.病理组织学变化:对照组小鼠粘膜表面光滑、无充血、水肿、腺体排列规则。模型组小鼠结肠粘膜上皮细胞变性坏死、充血、水肿、溃疡、炎症细胞浸润。青黛组可见轻度上皮细胞变性坏死,少量炎症细胞。组织学评分结果显示,与对照组相比,模型组的组织学评分显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,青黛组的组织学评分显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。3.指标检测:模型组小鼠血清和结肠中TNF-α、IL-6、TGF-β1表达水平明显高于对照组,IL-10表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组Bcl-2基因和蛋白表达低于对照组,而Bax和Caspase-3蛋白和mRNA明显表达高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。经青黛治疗后,与模型组相比较,小鼠血清中TNF-α、IL-6、TGF-β1表达显著降低,IL-10表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2蛋白和mRNA表达显著升高,而Bax和Caspase-3蛋白和mRNA表达显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结 论:1.青黛可缓解UC小鼠症状,改善肠粘膜的损伤。2.青黛可显著影响DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠炎症介质TNF-α、IL-6、TGF-β1、IL-10和细胞调亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白和mRNA的表达,提示青黛对UC具有治疗作用,其机制可能与调节炎症因子,抑制细胞调亡有关。
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