【摘 要】
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目的通过检测芹菜素联合放疗是否能促进人结肠癌HCT116细胞的凋亡,探讨芹菜素联合放疗对人结肠癌HCT116细胞凋亡的可能机制。方法1、不同剂量辐射(0、2、4、6、8Gy)单独作用人结肠癌HCT116细胞、不同浓度的芹菜素(0、10、20μmol/L)单独处理人结肠癌HCT116细胞、芹菜素(20μmol/L)与辐射(8Gy)联合处理人结肠癌HCT116细胞对Bcl-2、caspase-3、Cl
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目的通过检测芹菜素联合放疗是否能促进人结肠癌HCT116细胞的凋亡,探讨芹菜素联合放疗对人结肠癌HCT116细胞凋亡的可能机制。方法1、不同剂量辐射(0、2、4、6、8Gy)单独作用人结肠癌HCT116细胞、不同浓度的芹菜素(0、10、20μmol/L)单独处理人结肠癌HCT116细胞、芹菜素(20μmol/L)与辐射(8Gy)联合处理人结肠癌HCT116细胞对Bcl-2、caspase-3、Cleaved-PARP-1、AMPK、p-AMPK(Thr172)、P53、p-P53(Ser15)表达的影响。2、不同剂量辐射(0、2、4、6、8Gy)单独作用人结肠癌HCT116细胞、不同浓度的芹菜素(0、10、20、30、40、50、60μmol/L)单独处理人结肠癌HCT116细胞、芹菜素(20μmol/L)与辐射(8Gy)联合处理人结肠癌HCT116细胞对细胞内ROS的影响。3、在使用NAC预处理细胞后,芹菜素(20μmol/L)与辐射(8Gy)合用对人HCT116细胞ROS生成的影响,以及对细胞caspase-3、Cleaved-PARP-1、Bcl-2蛋白和AMPK、p-AMPK(Thr172)、P53、p-P53(Ser15)表达情况的影响。结果1、单独辐照、单独芹菜素、芹菜素联合放疗处理细胞时,与对照组相比,单独辐射、单独芹菜素、芹菜素联合放疗处理细胞均能增加人结肠癌HCT116细胞caspase-3、Cleaved-PARP-1、AMPK、p-AMPK(Thr172)、p-P53(Ser15)的表达水平,尤其在芹菜素联合放疗处理细胞时增加的更为明显;单独辐射、单独芹菜素、芹菜素联合放疗处理细胞均能降低人结肠癌HCT116细胞Bcl-2的表达水平,在芹菜素联合放疗处理细胞时降低的更为明显。P53的表达在各种处理因素作用下均无明显变化。2、单独辐照处理细胞时,与对照组(0Gy组)相比,辐射能显著增加人结肠癌HCT116细胞内ROS的生成(P<0.05),并随着辐射剂量的增加而增加。芹菜素单独处理细胞时,与对照组(芹菜素0μmol/L)相比,10~60μmol/L的芹菜素能显著增加人结肠癌HCT116细胞内ROS的生成(P<0.05),并以浓度依赖的方式增加。与单用芹菜素(20μmol/L)组、单独辐射(8Gy)组相比,芹菜素(20μmol/L)联合辐射(8Gy)组能显著增加人结肠癌HCT116细胞内ROS的生成(P<0.01)。3、与处理组(芹菜素(20μmol/L)联合辐射(8Gy)组)相比,NAC预处理组能明显降低人结肠癌HCT116细胞ROS的产生(P<0.01);在加入NAC预处理后能明显逆转芹菜素(20μmol/L)联合辐射(8Gy)组所致的AMPK、p-AMPK(Thr172)、p-P53(Ser15)、caspase-3、Cleaved-PARP-1蛋白表达增加,相反的能使Bcl-2蛋白的表达增加。结论1、实验结果表明芹菜素联合放疗可促进人结肠癌HCT116细胞的凋亡。2、芹菜素联合放疗能促进人HCT116细胞内ROS生成,进而激活AMPK,AMPK磷酸化激活后可磷酸化激活P53,从而使caspase-3、Cleaved-PARP-1蛋白表达增加、Bcl-2表达下降促进细胞凋亡。
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