第一部分漆黄素对脑出血后神经损伤和功能恢复的作用目的:脑出血(ICH)占卒中10-15%病例,存在高发病率和高死亡率及致残率。由于脑出血导致的血肿、血肿周围水肿、氧自由基的释放和继发炎症反应是导致预后不佳的主要原因。而迄今为止,临床上对脑出血的非手术治疗主要是通过对症支持性治疗,针对的方向主要聚焦在如降低颅内压、改善脑水肿、血流动力学稳定、维持内环境和营养支持。目前还没有任何治疗对改善脑出血患者的临床结果明显有效。研究表明,许多抗炎化合物能够减少ICH诱导的脑损伤。漆黄素(3,7,3’,4’四羟基黄酮)是一种黄酮醇,已被普遍用作抗氧化和抗炎化合物,并在神经系统疾病中发挥神经保护作用。据我们所知,漆黄素尚未被测试在ICH诱导的脑损伤治疗中的作用。在这项研究中,我们旨在测试漆黄素在小鼠模型中减轻ICH诱导的脑损伤和神经功能恢复方面的作用。方法:将60只C57BL/6J小鼠随机分为三组,假手术组、ICH对照组、漆黄素治疗组,其中漆黄素治疗组再分为四个亚组(每个亚组给药浓度分别为10 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg、90 mg/kg),每组各10只动物。采用脑部纹状体内注射胶原酶的方法建立小鼠的ICH模型。漆黄素腹腔给药3天。后采用mNSS评分评估各组ICH诱导的神经损伤严重程度;采用干湿重法测量各组小鼠脑组织含水量;采用TUNEL染色实验来检测各组小鼠大脑中损伤脑组织的细胞凋亡数目。结果:1、漆黄素能够改善ICH小鼠的神经功能损伤,且呈剂量依赖性,90 mg/kg漆黄素治疗对降低ICH小鼠mNSS评分效果最显著。2、漆黄素能够改善ICH小鼠的脑组织含水量,且呈剂量依赖性,90 mg/kg漆黄素治疗对降低ICH小鼠脑水肿效果最显著。3、漆黄素能够改善ICH小鼠脑损伤组织的细胞凋亡情况,且呈剂量依赖性,90 mg/kg漆黄素治疗对降低ICH小鼠脑组织细胞凋亡效果最显著。结论:在这项研究中,我们证明了漆黄素对脑出血后神经损伤和功能恢复的作用。漆黄素给药后显著降低了ICH老年小鼠的神经功能缺损评分、脑出血含水量百分比以及细胞凋亡的数据,且呈现剂量依赖性效应,在浓度为90 mg/kg时,神经保护效应最显著。这提示,我们的研究可能会扩展漆黄素的临床应用,并为ICH引起的脑损伤的药物治疗提供新的工具。第二部分漆黄素对脑出血后胶质细胞的活化和炎症反应的作用目的:漆黄素已被普遍用于抗氧化和抗炎化合物,并在神经系统疾病中发挥神经保护作用。据我们所知,尚未有研究表明漆黄素在ICH诱导的脑损伤中有炎症调节和胶质细胞活化作用。在这项研究中,我们旨在测试漆黄素用于小鼠模型中在炎症调节、星形胶质细胞和小胶质细胞活化中的有效性。方法:将60只小鼠随机分为三组,假手术组、ICH对照组、漆黄素治疗组,其中漆黄素治疗组再分为四个亚组(每个亚组给药浓度分别为10 mg/kg、30mg/kg、60 mg/kg、90 mg/kg),每组各10只动物。采用脑部纹状体内注射胶原酶的方法建立小鼠的ICH模型。漆黄素腹腔给药3天之后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑组织中炎症因子的水平,包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6和IL-10的水平。采用S100蛋白染色方法定量检测脑组织中活性星形胶质细胞的数量。采用Western blotting方法检测脑组织中离子化钙结合衔接分子1(Iba-1)的水平来评估小胶质细胞的数量。结果:1、漆黄素降低了脑出血后促炎症细胞因子(包括TNF-α,IL-1β,IL-6和IL-10的水平,且呈剂量依赖性,90 mg/kg漆黄素治疗对降低ICH小鼠促炎症细胞因子水平效果最显著。2、90 mg/kg漆黄素能够显著抑制脑出血后星形胶质细胞的活化。3、90 mg/kg漆黄素能够显著抑制脑出血后小胶质细胞的活化。结论:在这项研究中,我们证明了漆黄素对星形胶质细胞和小胶质细胞的活化以及炎症反应的调节作用。漆黄素剂量依赖地降低了脑出血后促炎症细胞因子的水平,并且显著抑制了星形胶质细胞和小胶质细胞的活化。第三部分漆黄素对脑出血后NF-?B信号通路的调节作用目的:漆黄素能够调节大量的细胞内信号通路,包括丝裂原活化蛋白激酶,核因子k B(NF-k B)和c-Jun N末端激酶信号通路。据我们所知,漆黄素尚未被检测在ICH诱导的脑损伤治疗中的信号通路的调节作用。NF-k B是一种负责细胞因子产生和细胞存活的蛋白质,经常被用作免疫抑制和抗炎分子的靶标。已经证明黄酮醇通过调节NF-k B途径发挥其抗炎功能。在这项研究中,我们旨在测试漆黄素在小鼠脑出血后脑组织中NF-k B信号传导方面的调节作用。方法:将30只小鼠随机分为三组,假手术组、ICH对照组和漆黄素治疗组(漆黄素给药浓度为90 mg/kg),每组各10只动物。采用脑部纹状体内注射胶原酶的方法建立小鼠的ICH模型。漆黄素腹腔给药3天。之后采用Western blotting方法评估各组小鼠脑组织中NF-k B途径中关键蛋白的水平。结果:1、漆黄素提高了小鼠脑出血后细胞质中P65的水平以及抑制了细胞核中P65水平,该结果与P65从细胞质向细胞核的易位是成功激活下游基因的必要条件。2、漆黄素抑制了小鼠脑出血后中Ik Bα蛋白磷酸化的水平并提高了Ik Bα蛋白水平。由于Ik B可以抑制NF-k B活化,并且Ik B蛋白磷酸化的减少也证实了NF-k B信号传导的抑制。结论:在这项研究中,我们证明了漆黄素在ICH诱导的脑损伤中的神经保护功能,这种作用可归因于促炎细胞因子的下调和NF-k B信号传导途径的抑制。