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第一部分CRBN通路蛋白在初诊多发性骨髓瘤患者中的表达及预后分析目的多发性骨髓瘤(MM)是一类克隆性浆细胞恶性肿瘤,发病率位居血液肿瘤第二位,在目前治疗方法下,MM仍属不可治愈疾病。随着免疫调节剂(IMi Ds)抗骨髓瘤作用被发现,新型IMi Ds不断应用及联合化疗方案的不断改善,MM患者的预后及生存明显提高。Cereblon(CRBN),Ikaros(IKZF1),Aialos(IKZF3)及MUM1蛋白被认为是CRBN通路蛋白的重要组成成分。CRBN是IMi Ds抗骨髓瘤作用的主要靶点,在细胞实验及动物实验中均验证CRBN高表达时细胞及小鼠对IMi Ds治疗敏感,而CRBN基因敲除或表达减低均导致细胞及小鼠对IMi Ds耐药。本课题旨在研究CRBN通路蛋白在初诊MM患者瘤细胞中的表达水平,并进一步分析其与初诊MM患者疗效及预后之间的关系。方法收集2012年1月至2017年6月于我中心就诊的123例初诊MM患者骨髓病理标本,采用免疫组织化学染色法分析患者浆细胞中CRBN通路蛋白表达水平,并整理患者临床资料、疗效及生存,分期CRBN通路蛋白表达水平与预后的关系。结果1.IMi Ds组,CRBN高表达患者ORR为88%,低表达患者ORR为42.3%,提示CRBN高表达者对IMi Ds疗效好(P=0.001);MUM1高表达患者ORR为83.3%,低表达患者ORR为48.1%(P=0.009)。在硼替佐米组CRBN通路蛋白表达高低与总缓解率无明显相关性。2.1)IMi Ds组,CRBN高表达患者中位OS为未达到,低表达患者中位OS为21个月(P=0.004);CRBN高表达患者2年OS率为86%,低表达患者2年OS率为44%(P=0.005);CRBN高表达患者中位PFS为28个月,低表达患者中位PFS为12个月(P=0.002);CRBN高表达患者2年PFS率为66%,低表达患者2年PFS率为17%(P=0.001);MUM1高低表达者中位OS均为未达到(P=0.021),高表达患者2年OS率为81%,低表达患者2年OS率为51%(P=0.003);MUM1高表达患者中位PFS为32个月,低表达患者中位PFS为12个月(P<0.001);MUM1高表达患者2年PFS率为63%,低表达者2年PFS率为20%(P<0.001)。2)CRBN高表达组,接受IMi Ds治疗者中位OS为未达到,接受硼替佐米治疗者中位OS为41个月(P=0.057),接受IMi Ds治疗者2年OS率为86%,接受硼替佐米治疗者2年OS率为68%(P=0.079);接受IMi Ds治疗者中位PFS为28个月,接受硼替佐米治疗者中位PFS为24个月(P=0.216),接受IMi Ds治疗者2年PFS率为66%,接受硼替佐米治疗者2年PFS率为45%(P=0.04)。3)MUM1高表达组,接受IMi Ds或硼替佐米治疗者中位OS为未达到,接受硼替佐米治疗者中位OS为34个月(P=0.021);接受IMi Ds治疗者2年OS率分别为81%,接受硼替佐米治疗者2年OS率为58%(P=0.014);接受IMi Ds治疗者中位PFS为32个月,接受硼替佐米治疗者中位PFS为16个月(P=0.017);接受IMi Ds治疗者2年PFS率为63%,接受硼替佐米治疗者2年PFS率为36%(P=0.003)。结论CRBN或MUM1高表达患者对IMi Ds治疗反应较好,生存期明显延长,而在低表达患者中,患者生存期明显缩短。CRBN和MUM1是IMi Ds治疗MM患者的预后良好因素。第二部分CRBN通路蛋白在克拉霉素联合来那度胺抗骨髓瘤作用中的研究目的多发性骨髓瘤(MM)是一类具有高度异质性的疾病,其临床特征主要包括溶骨性骨破坏、贫血、肾功能损伤及高钙血症等。CRBN通路是免疫调节剂(IMi Ds)抗骨髓瘤作用的重要途径,其蛋白表达高低影响患者对IMi Ds治疗的敏感性。既往研究显示克拉霉素+来那度胺+地塞米松(Bi Rd)方案疗效优于来那度胺+地塞米松(Rd)方案,但其作用机制尚未明确。本研究旨在观察克拉霉素联合来那度胺抗骨髓瘤细胞的作用,并进一步探索其分子机制。方法应用CCK8检测单药及联合用药对细胞增殖的影响;流式细胞术检测药物对细胞周期及凋亡的作用;q RT-PCR检测CRBN通路蛋白m RNA表达水平;Western blot检测CRBN通路蛋白表达水平。结果CCK8实验表明,克拉霉素可明显增强来那度胺对骨髓瘤细胞株的增殖抑制作用;联合作用可将大量细胞抑制在G0/G1期,抑制细胞分裂增殖,但对细胞凋亡无明显影响;联合作用后骨髓瘤细胞株CRBN通路蛋白水平明显减低。结论克拉霉素与来那度胺有明显的协同作用,两者联合后明显抑制细胞增殖,减低CRBN通路蛋白水平,从而增强来那度胺对骨髓瘤细胞株的抑制作用。