拟南芥RNA解旋酶突变体imprinted gene 1的表型分析

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胚乳是被子植物双受精的产物,在胚和幼苗的发育过程中起到重要作用,关系到种子发育和作物产量的形成。拟南芥基因组含有100多个RNA解旋酶基因,参与基因转录,pre-RNA的加工、成熟、转运,翻译以及核糖体的装配等多个细胞学过程,在植物发育和生理代谢过程中起作用。  我们鉴定到一个拟南芥T-DNA插入突变体imprinted gene1(img1),其T-DNA插入到一个RNA解旋酶基因上,该基因编码一个DEAD-box RNA解旋酶。img1/+杂合突变体后代中没有纯合体,杂合体自交后代中野生型与杂合体的分离比约1:1,并且杂合体角果种子缺失,约为野生型的60%。当用杂合体作母本,与野生型做杂交时,后代植株基因型中野生型与杂合体的比值约为2:1,而当用野生型作母本与杂合体杂交时,后代植株基因型中野生型与杂合体的比值接近1:1。分析突变配子的传递效率,发现该突变基因通过雌配子的传递效率明显降低。  img1/+突变体幼嫩角果的种子有三种类型,一种是大小类似于成熟的胚珠,呈白色,推测是传粉后未进一步发育的种子(类型a);另一种的体积大于第一种类型,但小于正常发育的种子,呈黄色,推测是发育一段时间后败育的种子(类型b);这两种类型的种子最终都败育。还有一种是正常发育的种子,它们分别占总数的25%,12%和65%。但是用杂合体作母本与野生型杂交,角果中存在正常发育的种子和类型 b的种子。推断img1/+突变体自交授粉的角果中类型b属于杂合体,而类型a为纯合体。  qRT-PCR分析、pIMG1::GUS活性分析发现IMG1在拟南芥的根、分生组织、叶、花、雌蕊中都有表达,并且在花和雌蕊中的表达量较高,但是不在花粉中表达。原位杂交实验发现IMG1在整个雌配子体的发育过程中表达,在胚和胚乳中也检测到较强的杂交信号。  img1/+突变体花粉的亚历山大染色、花粉萌发等与野生型并无差别。我们利用带有Lat52::GUS标记的花粉授粉后GUS染色以及苯胺蓝染色观察,发现虽然有13%的胚珠孔附近花粉管出现缠绕的现象,但是最终都能进入珠孔。将带有精细胞标记pHTR10::HTR10-mRFP的花粉授到img1/+突变体的柱头上,20h后观察。与野生型一样,所有 img1/+突变体的胚珠中都没有红色荧光信号,说明img1/+所有雌配子体都能完成受精。  利用野生型花粉给突变体植株授粉3d后,发育异常种子的胚已经发育到球形胚阶段,但是观察不到胚乳。将带有标记胚和胚乳GRP23:GUS标记的花粉授到img1/+突变体柱头上,3d后检测GUS信号发现,败育的种子中只有胚中存在GUS信号,胚乳没有发育;而正常膨大的种子中,胚和胚乳均有GUS信号。所以我们推测img1/+是由胚乳发育出现异常,不能提供胚发育所需营养导致种子败育。这些结果暗示IMG1可能是印记基因,来自于父本的IMG1表达被沉默,来自于母本的IMG1表达,在胚乳和胚的发育中起作用。
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