绵羊和牛体外受精的研究

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哺乳动物体外受精已有一百二十多年历史,由于在生产中极大的繁殖效率和科研中试验胚胎材料充分的满足能力,体外受精研究已成为一个古老而重要的课题。该技术包括三个主要环节,即初级卵母细胞的成熟、卵母细胞的体外受精和胚胎体外培养。本文对绵羊体外受精和牛体外受精进行进一步研究,旨在巩固现有体外受精培养体系,提高胚胎的生产效率和质量。1、绵羊卵母细胞体外成熟时,在使用相同较低浓度激素(0.8μg/mL FSH、4IU/mL LH)时,成熟液添加5%OCS(A 组),成熟液添加5%FBS(B 组)进行对照,结果显示A 组卵母细胞的第一极体释放率(69.30%(81/118))、卵裂率(60.84%(129/212))显著高于B 组(10.00%(12/121)、0(0))(P<0.05)。当向成熟液A 中分别加入3%小卵泡液(C 组)和3%大卵泡液(D 组)与A 组进行对照,结果显示A 组(OCS 组)第一极体释放率(69.30%(81/118))、卵裂率(60.84%(129/212))显著高于C 组(OCS+3%小卵泡液)(53.10%(59/111))、(50.00%(98/196))(P<0.05);D 组(OCS+3%大卵泡液)第一极体释放率(78.20%(84/108))、卵裂率(71.67%(167/233))显著高于A 组(OCS组)第一极体释放率(69.30%(81/118))、卵裂率(60.84%(129/212))(P<0.05);D 组(OCS+3%大卵泡液)第一极体释放率(78.20%(84/108))、卵裂率(71.67%(167/233))显著高于C 组(OCS+3%小卵泡液)(53.10%(59/111)、50.00%(98/196))(P<0.05)。表明:5%OCS 成熟液中加入3%绵羊小卵泡液对绵羊卵母细胞成熟具有抑制作用,加入3%绵羊大卵泡液对绵羊卵母细胞成熟具有促进作用。2、绵羊卵母细胞体外受精时,受精液①(mSOFaa+20%绵羊血清)、②(mSOFaa+20%绵羊血清+5IU/mL 肝素)、③(mSOFaa 液+20%绵羊血清+5IU/mL 肝素+5mmol/L 咖啡因)的卵裂率差异显著(35.67%(101/283)、66.84%(262/392)、85.84%(91/106))(P<0.05),表明:肝素、咖啡因可增强绵羊精子的获能。受精液③(mSOFaa 液+20%绵羊血清+5IU/mL 肝素钠+5mmol/L 咖啡因)的卵裂率(85.84%(91/106))显著高于受精液④(mSOFaa液+6 mg/mL BSA +5IU/mL 肝素+5mmol/L咖啡因()5.33%(8/150)()P<0.05)。表明:BSA不适宜用于绵羊精子获能,而绵羊血清能促使绵羊精子充分获能。3、用绵羊附睾精子和冻精精子作受精对照,结果显示附睾精子受精率(85.84%(91/106))显著高于冻精精子受精率(60.90%(67/110))(P<0.05)。表明:与冻精相比附睾的精子易获能,体外受精效果好。受精时对5%CO2 空气气态和5%CO2、5%O2、90%N2 气态对照,结果显示5%CO2 空气气态受精率(85.84%(91/106))显著高于5%CO2
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