水稻根系相关内生细菌的分离鉴定及生防潜能研究

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水稻(Oryza sativa L.)是世界上最重要的粮食作物之一。水稻在生长的过程中受到各种病原菌的影响,其中植物病原真菌可使水稻产生多种重要的病害,这些水稻疾病的爆发导致严重的经济损失。目前防治这些水稻病害的主要途径是使用化学农药,然而化学农药长期、大量不合理的使用导致其产生的抗药性,抗药性菌株的出现已成为病害频繁爆发的最主要因素。随着经济社会的快速发展,人们对农产品质量安全和生态环境的要求越来越高,这迫使我国必须尽快研究和开发出替代化学农药的绿色安全高效生物防治制剂以有效地防治水稻病害。生防微生物及其代谢产物具有防效高、环境友好且对人畜无毒等优点,是一类理想的可替代化学农药的产品。根系内的内生细菌及其代谢产物具有抑制植物病原菌的活性,从而增强植物对病原菌的抵抗力。许多内生细菌由于对植物病原菌具有良好的抑制活性,已经被开发成生物防治剂在田间广泛使用。然而,水稻根系内生细菌对植物病原真菌的研究却鲜有报道。本研究选取水稻田间不同品种的健康植株,对水稻根系的内生细菌进行了分离鉴定,测定了内生细菌对几种重要水稻真菌病原物的抑制活性,并对内生细菌生防机制进行了初步探究,具体的研究结果如下:1.从3个水稻品种的根系中随机分离出了122株与水稻相关的内生细菌,PCR扩增16S rRNA并对其进行测序。系统发育分析结果显示这些内生细菌分别属于6个不同的属和22个不同的种。这6个属分别是:芽孢杆菌属,假芽孢杆菌属,裂殖杆菌属,潘氏杆菌属,铜杯菌属和微杆菌属;而鉴定的22种分别为Bacillus altitudinis,Bacillus aryabhattai,Bacillus cereus,Bacillus fusiformis,Fictibacillus phosphorivorans,Cupriavidus metallidurans,Bacillus marisflavi,Bacillus wiedmannii,Fictibacillus nanhaiensis,Bacillus subterraneous,Bacillus thioparans,Lysinibacillus mangiferihumi,Paenibacillus cucumis,Paenibacillus alvei,Bacillus pseudomycoides,Bacillus lehensis,Bacillus acidiceler,Bacillus tequilensis,Bacillus indicus,Bacillus toyonensis,Paenibacillus uliginis,and Microbacterium laevaniformans。在这些鉴定的水稻内生细菌中,属于芽孢杆菌的有15种,占所有分离内生细菌的12%,是最主要的内生细菌类群。2.双向对峙培养实验结果显示,72株内生细菌对四种重要水稻真菌病原物具有抑制活性。其中10株内生细菌对水稻稻瘟病菌表现出较好拮抗潜力,其抑制率范围为57.20%至82.40%,C-2B-2对稻瘟病抑制效果达到82.40%;20株内生细菌表现出抑制水稻立枯病的能力,抑菌率范围为58.00%至72.60%,其中C-3Y-2对水稻立枯病的抑制效果达到72.60%;16株内生细菌对水稻恶苗病的菌丝生长具有显著的抑制效果,抑制率范围分别为47.50%至68.90%;26株内生细菌抑制了水稻纹枯病病原真菌的菌丝生长,抑制率范围为37.80%至64.70%。对这些内生细菌的次生代谢产物合成基因簇部分片段的PCR实验表明,这些内生细菌具有产生活性次生代谢物的潜能。本研究通过对三个不同品种的水稻根系内生细菌进行了分离,共获得122株内生菌,其中72株内生细菌具有抑制水稻病原真菌的生物活性。在这些具有生防潜能的内生细菌中,C-2B-2对稻瘟病、C-3Y-2对水稻立枯病显示出良好的抑制效果,具有开发为生物防治剂的潜力。
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