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目的:
本研究通过构建实验小鼠脑出血模型,以破血化瘀、填精补髓汤剂为中药治疗方药,探讨破血化瘀、填精补髓中药汤剂对实验性脑出血小鼠Keap1-Nrf2-ARE信号通路的影响,为破血化瘀、填精补髓法改善小鼠脑出血后继发性损伤提供理论依据。
方法:
1.选取野生型C57雄性小鼠与基因敲除型雄性小鼠,体重22g~25g,随机分为野生型假手术组、基因敲除型假手术组、野生型模型组、基因敲除型模型组、野生型方剂组、基因敲除型方剂组,共156只,参考Rynkowski造模方法制作实验性脑出血模型。
2.通过神经行为学评分、干湿重法、HE染色法观察破血化瘀、填精补髓法对实验性脑出血小鼠的神经功能缺损、脑含水量及血肿周围脑组织病理的干预效果。
3.应用Western blot技术检测Nrf2信号通路相关蛋白表达,包括Nrf2,上游Keap1,和下游HO-1、NQO1。
4.应用RT-qPCR技术检测Nrf2信号通路相关基因表达,包括Nrf2,上游Keap1,和下游HO-1、NQO1,并对各指标进行相关性分析。
结果:
1.假手术组 Longa评分为0分,野生型方剂组和对照组与模型组比较可明显降低神经功能缺损评分(P<0.05),其中方剂组功能恢复最为明显,与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
2.模型组小鼠脑含水量较假手术组增加明显(P<0.05),方剂组和对照组脑含水量与模型组比较下降明显,其中方剂组下降更为显著,与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
3.模型组与方剂组和对照组 HE染色均显示脑组织病理变化明显,但方剂组和对照组的脑组织破坏较模型组小鼠轻,与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
4. Western blot法检测3d时血肿周围脑组织中Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1含量,方剂组和对照组均低于模型组,存在显著差异(P<0.05),方剂组降低Nrf2、 Keap1、HO-1、NQO1能力与敲基因组比较,存在显著差异(P<0.05)。
5. RT-qPCR检测,Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1mRNA表达趋势一致。模型组与假手术组相比,Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1表达水平明显增高(P<0.01);野生方剂组与模型组相比,表达明显降低(P<0.05),与敲基因方剂组之间差异明显(P<0.05)。
结论:
1.破血化瘀、填精补髓中药汤剂能够改善小鼠脑出血后神经功能障碍和脑水肿的程度,可以有效地缓解脑出血继发性损伤。
2.破血化瘀、填精补髓中药汤剂可上调小鼠脑出血后 Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1的表达,其神经保护作用可能的机制或许与激活 Keap1-Nrf2-ARE通路的相关抗氧化作用有关。
3. Nrf2基因敲除加重小鼠脑出血后神经元死亡、神经功能及氧化应激损伤,破血化瘀、填精补髓中药汤剂可能通过调控Nrf2治疗脑出血继发性损伤。
本研究通过构建实验小鼠脑出血模型,以破血化瘀、填精补髓汤剂为中药治疗方药,探讨破血化瘀、填精补髓中药汤剂对实验性脑出血小鼠Keap1-Nrf2-ARE信号通路的影响,为破血化瘀、填精补髓法改善小鼠脑出血后继发性损伤提供理论依据。
方法:
1.选取野生型C57雄性小鼠与基因敲除型雄性小鼠,体重22g~25g,随机分为野生型假手术组、基因敲除型假手术组、野生型模型组、基因敲除型模型组、野生型方剂组、基因敲除型方剂组,共156只,参考Rynkowski造模方法制作实验性脑出血模型。
2.通过神经行为学评分、干湿重法、HE染色法观察破血化瘀、填精补髓法对实验性脑出血小鼠的神经功能缺损、脑含水量及血肿周围脑组织病理的干预效果。
3.应用Western blot技术检测Nrf2信号通路相关蛋白表达,包括Nrf2,上游Keap1,和下游HO-1、NQO1。
4.应用RT-qPCR技术检测Nrf2信号通路相关基因表达,包括Nrf2,上游Keap1,和下游HO-1、NQO1,并对各指标进行相关性分析。
结果:
1.假手术组 Longa评分为0分,野生型方剂组和对照组与模型组比较可明显降低神经功能缺损评分(P<0.05),其中方剂组功能恢复最为明显,与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
2.模型组小鼠脑含水量较假手术组增加明显(P<0.05),方剂组和对照组脑含水量与模型组比较下降明显,其中方剂组下降更为显著,与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
3.模型组与方剂组和对照组 HE染色均显示脑组织病理变化明显,但方剂组和对照组的脑组织破坏较模型组小鼠轻,与基因敲除组比较存在显著差异(P<0.05)。
4. Western blot法检测3d时血肿周围脑组织中Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1含量,方剂组和对照组均低于模型组,存在显著差异(P<0.05),方剂组降低Nrf2、 Keap1、HO-1、NQO1能力与敲基因组比较,存在显著差异(P<0.05)。
5. RT-qPCR检测,Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1mRNA表达趋势一致。模型组与假手术组相比,Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1表达水平明显增高(P<0.01);野生方剂组与模型组相比,表达明显降低(P<0.05),与敲基因方剂组之间差异明显(P<0.05)。
结论:
1.破血化瘀、填精补髓中药汤剂能够改善小鼠脑出血后神经功能障碍和脑水肿的程度,可以有效地缓解脑出血继发性损伤。
2.破血化瘀、填精补髓中药汤剂可上调小鼠脑出血后 Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1的表达,其神经保护作用可能的机制或许与激活 Keap1-Nrf2-ARE通路的相关抗氧化作用有关。
3. Nrf2基因敲除加重小鼠脑出血后神经元死亡、神经功能及氧化应激损伤,破血化瘀、填精补髓中药汤剂可能通过调控Nrf2治疗脑出血继发性损伤。