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目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合TNP-470抗肝癌血管新生的协同效应。方法:分别进行体外、体内实验研究。1、体外实验。(1)四唑盐(MTT)比色法观察:人肝癌细胞株SMMC-7721和人脐静脉内皮细胞株ECV304分别接种于培养板,待细胞贴壁后,加入As2O3和TNP-470 (As2O3终浓度0、1、2、4μg/ml逐一分别与TNP-470终浓度0、0.5、1、2μg/ml联合作用,共16组),培养至预定时间,观察细胞生长抑制率。(2)透射电镜观察:上述细胞加药培养48小时后(分组同上),收集细胞,透射电镜观察。(3)免疫组化观察:收集经As2O3(终浓度2μg/ml)联合TNP-470(终浓度2μg/ml)联合作用48小时的SMMC-7721细胞和ECV-304细胞,分别检测两细胞株血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达变化。2、体内试验。(1)鸡胚尿囊膜(CAM)法检测:100只鸡胚(7日龄)随机分四组:生理盐水对照组、20μg/ml As2O3组、20μg/ml TNP -470组、20μg/ml As2O3联合20μg/ml TNP -470组,每组25只,以甲基纤维素作为加药载体,加药孵育后观察药物对血管生长的影响。(2)建立裸鼠人肝癌移植瘤LCI-D20模型,随机分为4组:生理盐水(NS)组、As2O3组、TNP-470组、As2O3联合TNP-470组,每组8只,肿瘤移植后的第9天开始用药,As2O3(2.5mg/kg)腹腔注射给药,每日一次;TNP-470(30mg/kg)皮下给药,隔日一次;用药21天。停药第二天处死裸鼠,完整剥取移植瘤瘤体,称重,计算瘤重抑制率;光学显微镜和透射电镜观察药物对移植瘤体的影响;免疫组化法观察药物对移植瘤微血管密度(MVD)以及对VEGF、EGFR表达情况的影响。结果:1、体外实验结果:(1)As2O3和TNP-470两药单独应用均可抑制SMMC-7721细胞及ECV-304细胞的增殖;两药联合应用,分别作用于SMMC-7721细胞和ECV-304细胞24h、48h和72h,细胞的增殖率均低于单独应用As2O3和TNP-470。(2)透射电镜观察,对照组:细胞膜完整,细胞器结构正常,染色质均匀;用药组:均发现部分细胞出现细胞凋亡超微结构改变,胞质中见空泡及凋亡小体形成,细胞核固缩,核内染色质聚集于核膜内侧呈团块或新月状;联合用药组与单药组之间电镜下细胞超微结构无明显差异。(3)SMMC-7721细胞和ECV-304细胞未加药前的VEGF、EGFR表达均呈强阳性;2μg/ml As2O3作用48小时后,SMMC-7721细胞和ECV-304细胞的VEGF、EGFR表达均呈弱阳性,2μg/ml TNP-470作用