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粘蛋白家族成员MUC1是一种肿瘤相关抗原,它在肿瘤细胞上的表达与正常细胞有显著差异,是肿瘤免疫研究的理想靶点。课题组前期将MUC1基因插入pMAL-p2原核表达载体,转染大肠杆菌制备出稳定高效表达MUC1-MBP融合蛋白的工程菌。前期研究证实MUC1-MBP融合蛋白具有良好的抗肿瘤作用,作为肿瘤疫苗有较好的开发前景。而疫苗研发的中试工艺要求有较大的生产规模,所以我们迫切需要将工程菌的摇瓶培养放大至发酵罐发酵,再通过对纯化工艺进行研究以生产出具有较高质量的MUC1-MBP融合蛋白。本研究确立了三角烧瓶摇瓶培养条件下IPTG的诱导浓度和诱导时间。之后在摇瓶培养的基础上对工程菌发酵过程中诱导剂IPTG的诱导时机(OD值)和诱导时间进行了研究,从而初步确立了工程菌发酵工艺。接下来,对获得的工程菌进行高压均质法破碎后,尝试采用等电点沉淀法和阳离子交换层析法,并对pH值和缓冲液等条件进行了优化,最终获得了纯度较高的MUC1-MBP融合蛋白。采用高效液相色谱法鉴定所得MUC1-MBP融合蛋白纯度>95%。鲎试剂凝胶法检测MUC1-MBP融合蛋白内毒素残留浓度符合《中华人民共和国药典》标准。Western blotting鉴定结果显示MUC1-MBP融合蛋白具有正确的表位以及较强的抗原性。本研究初步形成了 MUC1-MBP融合蛋白的工程菌发酵工艺和纯化工艺,并纯化出符合质量标准的MUC1-MBP融合蛋白,为其作为肿瘤疫苗的临床研究奠定了基础。