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[目的]基于“易层”贴敷膏治疗膝骨性关节的临床疗效,观察其对IL-1β、MMP-1、MMP-13及TIMP-1表达的影响,并探讨“易层”贴敷膏与介导炎症的NF-kB信号通路的相关性,阐明“易层”贴敷膏治疗膝骨性关节炎的靶向作用及机制。[方法]实验一：以健康的,骨骼成熟的新西兰大白兔30只,雌雄各半,体质量(2.5±0.1)kg,称重后随机分为3组：正常组、模型对照组和治疗组,每组10只；适应性饲养1周后,制备兔膝骨性关节炎模型,造模成功后6周,治疗组予以“易层”贴敷膏外用于膝关节表面皮肤,每日给药一次,连续2周。空白组及模型对照组均不给药。2周后处死所有动物,取兔膝关节滑膜组织,Western Blot法检测MMP-1及MMP-13蛋白表达水平,RT-PCR法检测IL-1β、MMP-1及MMP-13基因表达水平。实验二：以健康的,骨骼成熟的新西兰大白兔30只,雌雄各半,体质量(2.5±0.1)kg,称重后随机分为3组：正常组、模型对照组和治疗组,每组10只；适应性饲养1周后,制备兔膝骨性关节炎模型,造模成功后6周,治疗组予以“易层”贴敷膏外用于膝关节表面皮肤,每日给药一次,连续2周。空白组及模型对照组均不给药。2周后处死所有动物,取兔膝关节软骨组织,番红O染色观察软骨表面,Western Blot法检测MMP-1、MMP-13及TIMP-1蛋白表达水平,RT-PCR法检测IL-1β、MMP-1、MMP-13及TIMP-1基因表达水平。实验三：以健康的,骨骼成熟的新西兰大白兔30只,雌雄各半,体质量(2.0±0.1)kg,称重后随机分为3组：正常组、模型对照组和治疗组,每组10只；适应性饲养1周后,制备兔膝骨性关节炎模型,造模成功后6周,治疗组予以“易层”贴敷膏外用于膝关节表面皮肤,每日给药一次,连续2周。空白组及模型对照组均不给药。2周后处死所有动物,取兔膝关节软骨组织,Western Blot法检测软骨组织TLR-4、NF-kB p65蛋白表达水平,RT-PCR法检测软骨组织TLR-4、NF-κBP65基因表达水平。[结果]实验一：Western Blot结果显示：模型组中MMP-1蛋白含量高于治疗组(P<0.05),正常组中MMP-1含量最低(P<0.05)。各组MMP-13蛋白含量之间有统计学差异(P<0.05),模型组含量最高,空白组含量最低。RT-PCR结果显示：各组滑膜中MMP-1的基因表达量通过Kruskal-Wallis H法检验,均有统计学差异(P<0.05),其中模型对照组中表达量最高,正常组最低；各组MMP-13基因表达量采用单因素方差分析(ANOVA),治疗组滑膜中MMP-13基因表达明显低于模型对照组(P<0.05),但高于正常组(P<0.05)；滑膜各组IL-1β基因表达选择单因素方差分析(ANOVA),正常组中IL-1β表达明显低于模型对照组及治疗组(P<0.01),模型对照组与治疗组之间无统计学差异。实验二：组织学染色结果：正常组、模型组及治疗组软骨标本石蜡切片,番红O染色后,参考Mankin评分标准进行评估,模型组评分显著高于正常组(P<0.01),治疗组评分明显低于模型组(P<0.01)。Western Blot法结果显示：模型组中MMP-1含量高于治疗组(P<0.05),正常组中MMP-1含量最低(P<0.01)；模型组MMP-13含量明显高于治疗组和正常组(P<0.01),治疗组中TIMP-1的含量明显高于模型组与正常组,之间存在统计学差异。RT-PCR结果显示：模型组中MMP-1及MMP-13表达量显著高于正常组(P<0.01),治疗组MMP-1及MMP-13表达量明显低于模型组(P<0.05)；各组软骨组织中TIMP-1表达量比较发现,治疗组中TIMP-1的表达量明显高于模型组(P<0.01)；各组间IL-1β表达未见明显统计学差异。实验三：Western Blot结果显示：模型组软骨组织中TLR-4、NF-κB p65的含量明显高于空白组(P<0.01),治疗组中TLR-4、NF-κB p65蛋白含量明显低于模型组(P<0.01)。治疗组中NF-κB p65蛋白含量与空白组无明显差异(P>0.05),无统计学意义。RT-PCR结果显示：模型组软骨组织中TLR-4、NF-kB p65基因含量明显高于空白组(P<0.01),治疗组中NF-kB p65基因含量低于模型组(P<0.05),治疗组中TLR-4基因含量明显低于模型组(P<0.01)。[结论]“易层”贴敷膏能下调模型兔滑膜及软骨组织中MMP-1及MMP-13的含量；降低模型兔滑膜及软骨组织中MMP-1及MMP-13的基因的表达,同时,使用“易层”贴敷膏治疗后增加了TIMP-1的生成,也抑制了MMPs的分泌,恢复MMPs/TIMP-1的动态平衡。由此可见,“易层”贴敷膏能减少软骨细胞外基质的降解,对软骨基质有保护作用。此外,“易层”贴敷膏对NF-kB信号通路上游及关键物质蛋白及基因表达均具有一定的抑制作用,而这一结果与药物临床运用的表现是相符合的。但实验中发现其未明显改变IL-1β的基因的表达,但临床上使用本技术能明显改善患者局部肿胀及疼痛,因此,我们推测“易层”贴敷膏仍对局部炎症有缓解作用,但并非通过IL-1 β介导途径。