【摘 要】
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目的研究lncRNA NEAT1和miR-500a-3p对胃癌细胞的增殖、侵袭和凋亡能力的影响,验证lncRNA NEAT1和miR-500a-3p的靶向关系,探讨lncRNA NEAT1在胃癌细胞中的作用及调控机制。方法利用生物信息学网站分析数据库中lncRNA NEAT1和miR-500a在胃癌和正常组织中的表达水平,并且分析lncRNA NEAT1和miR-500a与胃腺癌患者分期的关系。利
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目的研究lncRNA NEAT1和miR-500a-3p对胃癌细胞的增殖、侵袭和凋亡能力的影响,验证lncRNA NEAT1和miR-500a-3p的靶向关系,探讨lncRNA NEAT1在胃癌细胞中的作用及调控机制。方法利用生物信息学网站分析数据库中lncRNA NEAT1和miR-500a在胃癌和正常组织中的表达水平,并且分析lncRNA NEAT1和miR-500a与胃腺癌患者分期的关系。利用数据库中的相关信息来预测lncRNA NEAT1和miR-500a-3p二者之间的靶向关系,随后双荧光素酶报告实验用于验证lncRNA NEAT1和miR-500a-3p之间的靶向作用。使用RT-PCR检测三种胃癌细胞株（AGS、HST2和FU9）和正常的胃黏膜上皮细胞GES1中lncRNA NEAT1和miR-500a-3p的表达水平,筛选出异常表达相对明显的胃癌细胞株进行下一步的实验。构建过表达lncRNA NEAT1和miR-500a-3p的胃癌细胞株,分别采用CCK-8实验、克隆形成实验以及transwell实验、流式细胞术检测lncRNA NEAT1通过miR-500a-3p对胃癌细胞系增殖、侵袭和凋亡能力的影响。最后运用Western Blot实验检测lncRNA NEAT1和miR-500a-3p分别对胃癌细胞中凋亡蛋白表达的影响。结果（1）生物信息学网站相关数据分析结果表明:相对于癌旁和正常胃粘膜组织,lncRNA NEAT1在胃腺癌组织中呈低表达,而各期胃癌组织之间的lncRNA NEAT1表达无明显差异;相对于癌旁组织,miR-500a在胃腺癌组织中呈高表达,且Ⅰ期胃癌患者的胃腺癌组织中miR-500a的表达升高幅度尤为明显（P＜0.05）。靶基因数据库预测结果:lncRNA NEAT1和miR-500a-3p之间存在着靶向结合的关系。（2）RT-PCR结果表明:相较于GES1,在胃癌细胞中lncRNA NEAT1呈低表达水平,而miR-500a-3p呈高表达水平（P＜0.05）。（3）双荧光素酶报告实验结果表明:相对于对野生型胃癌细胞,过表达miR-500a-3p后的胃癌细胞的荧光素酶活性降低,具有显著的统计学差异（P＜0.05）。（4）CCK-8细胞增殖实验和克隆形成实验结果表明:过表达lncRNA NEAT1后胃癌细胞的增殖能力明显下降,再将细胞过表达miR-500a-3p后,其增殖能力得到恢复（P＜0.05）。（5）Transwell侵袭实验结果表明:胃癌细胞在过表达lncRNA NEAT1后,细胞的侵袭能力减弱,然而再过表达miR-500a-3p后,其侵袭能力得到恢复（P＜0.05）。（6）流式细胞术结果表明:过表达lncRNA NEAT1后,胃癌细胞的凋亡水平升高;再过表达miR-500a-3p后,胃癌细胞的凋亡水平下降（P＜0.05）。（7）Western Blot实验结果表明:胃癌细胞过表达lncRNA NEAT1时,凋亡蛋白Bcl-2表达被抑制,Bax和cleaved caspase-3的表达水平升高;而细胞再过表达miR-500a-3p后这些蛋白的表达呈相反的趋势（P＜0.05）。结论胃癌细胞中lncRNA NEAT1呈现低表达状态,miR-500a-3p呈高表达状态;lncRNA NEAT1可通过靶向抑制miR-500a-3p的表达,进而影响胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡。
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