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目的:研究蕨麻乙醇提取物对体外培养心肌细胞缺氧损伤的保护作用及机制,对慢性缺氧小鼠心肌损伤的保护作用及机制。 方法:细胞培养研究:(1)取新生1-3d的SD大鼠心肌细胞原代培养,采用MTT法检测不同缺氧时间细胞的存活率,以确定心肌细胞的最佳缺氧时间,建立心肌细胞缺氧损伤模型。(2)将搏动状态良好,生长密度无明显差异的心肌细胞随机分为正常对照组、缺氧损伤模型组、蕨麻醇提物0.024g/ml、0.012g/ml、0.006g/ml干预组(缺氧同时加入蕨麻乙醇提取物)。缺氧6h后,采用生化手段检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性,研究蕨麻对缺氧致心肌细胞膜损伤的保护作用;检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质氧化代谢产物丙二醛(MDA)含量,研究蕨麻对缺氧致心肌细胞脂质过氧化损伤的保护作用;采用H.E染色、透射电镜技术研究蕨麻对缺氧损伤心肌细胞组织形态及超微结构的影响;采用Hochest-PI染色及流式细胞术,研究蕨麻对心肌细胞凋亡率的影响;采用细胞免疫染色方法探讨蕨麻影响缺氧损伤心肌细胞凋亡的机制。 动物实验研究:健康成熟雌性小鼠(25-30g),随机分为正常对照组、慢性缺氧模型组、蕨麻醇提物5g/kg、2.5g/kg干预组(每日缺氧前1小时给予蕨麻乙醇提取物)。模型组