【摘 要】
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目的:探讨转染Klotho基因(KL)的表达对可溶性核因子κB配体的受体活化因子(sRANKL)诱导的RAW264.7单核巨噬细胞向破骨细胞分化的影响。方法:实验设计分为高表达KL组(Ad-KL组)
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目的:探讨转染Klotho基因(KL)的表达对可溶性核因子κB配体的受体活化因子(sRANKL)诱导的RAW264.7单核巨噬细胞向破骨细胞分化的影响。方法:实验设计分为高表达KL组(Ad-KL组)、空载体组(AdGFP组)与空白对照组,倒置荧光显微镜观察重组腺病毒转染RAW264.7情况;实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测KL在各组的表达情况;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测KL的表达对sRANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化的形态学影响;RT-PCR和蛋白质印迹法检测各组破骨细胞成熟标志物TRAP、组织蛋白酶K(CTSK)的相对表达情况。结果:Ad-KL成功转染RAW264.7细胞,与Ad-GFP组和空白对照组比较,Ad-KL组细胞KL mRNA表达水平显著升高且蛋白相对表达水平显著增加(P<0.01);TRAP染色显示,Ad-KL组TRAP阳性细胞数量显少于Ad-GFP组和空白对照组,体积也更小;与Ad-GFP组和空白对照组比较,Ad-KL组TRAP和CTSK mRNA表达降低且蛋白相对表达水平也明显降低(P<0.01)。结论:KL的表达可以抑制s RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞的分化过程。
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