1实验背景心脑血管疾病是当今社会极为普遍的疾病,其发病率、死亡率、致残率都很高,已成为我国和世界上严重危害人类生命健康的疾病之一,被称为发达国家的“头号杀手”。我国心脑血管疾病发病率虽没有西方国家那么高,但正呈上升发展趋势。心脑血管的重要病理基础—动脉粥样硬化(Atherosclerosis, As)一直是人们研究心、脑血管疾病发生机理及探索防治手段的突破口。一百多年来,很多学者致力于As的机制研究并提出了很多假说,主要有血栓形成学说、炎症学说、脂质浸润学说、单克隆学说、损伤反应学说、氧化应激学说等,这些假说都都从不同的侧面反映了形成As的多因素复杂机制,但是在这些现有学说的指导下,尽管人们的生活方式改变了很多,但目前研究的药物很有限,并且只能解释部分病人的病痛,不能从根本上预防及治疗As。20世纪60～80年代,有若干学者提出滋养血管微循环障碍致As形成的假说,初步证明滋养血管微循环障碍在As形成过程中具有重要作用,但是没进行关于该假说的预防和治疗的药物研究。2实验目的①通过尾静脉注射高分子右旋糖苷,建立大鼠As早期病变的模型。②重新提出大动脉滋养血管微循环障碍导致As早期病变的假说,强调预防作用,引起重视,以待产生新的预防方法及药物。③研究中药-银杏叶片对As早期病变的预防作用。3实验方法40只雄性Wistar大鼠,随机分为5组,每组8只,均喂养普通饲料。正常饲料组：仅喂养普通饲料。生理盐水组：尾静脉注射生理盐水2ml/Kg/d。高分子右旋糖苷组(模型组)：高分子右旋糖酐1g,10ml生理盐水,现用现配,尾静脉注射2ml/kg/d的剂量给药。银杏叶组：以每天一次性注射高分子右旋糖苷2ml/Kg,同时使银杏叶片6.5mg/Kg/d碾碎、溶解于热水放至温灌胃；羟苯磺酸钙组：尾静脉注射高分子右旋糖苷2ml/Kg/d,同时予羟苯磺酸钙胶囊0.14g/Kg/d溶解于热水放至温灌胃。常规饲养3个月后,处死,取材。在第91天,大鼠空腹过夜,电子天平称重。应用3.5%水合氯醛(0.33 ml／kg)腹腔内注射麻醉,腹主动脉取血,取血完毕后剪开右心耳,从左心尖部进针,先用0.9%生理盐水180 ml冲洗全身血管,再用10%的甲醛溶液180mL灌流行在体原位固定,约30min内固定完成后,解剖大鼠的腹腔,分别取下胸主动脉、腹主动脉,将这些血管分别放入10%的甲醛固定液的小玻璃瓶中固定。固定完成后,通过HE、MASSON,弹力纤维染色及免疫组化做病理学研究。4实验结果4.1抽血检测结果4.1.1血常规检测结果统计学分析：与正常组比较,模型组RBC,MCHC、PLT升高,具有显著统计学意义(p<0.01)。与模型组比较,银杏叶组和羟苯磺酸钙组PDW值降低,具有统计学意义(P<0.01)；银杏叶组与羟苯磺酸钙组比较差异不具有统计学意义。盐水组与正常组比较,差异不具有统计学意义。结果表明尾静脉注射高分子右旋糖酐引起了机体的高凝状态,同时银杏叶片与羟苯磺酸钙胶囊使PDW值降低,起到降低PDW的作用；并且排除了炎症的形成对As的影响。4.1.2血生化检测结果统计学分析：与正常组比较,模型组、TG降低,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。其余指标未见明显改变,不具有统计学意义。结果表明,大鼠尾静脉注射高分子右旋糖苷引起了TG的降低,这与长期应用高分子右旋糖苷导致肝功能的损害有关。综上结果,因此排除了高血糖、高血脂对高As模型的影响。4.1.3血流变检测结果经方差分析：与正常组比较,模型细全血粘度、血浆粘度检测值均升高,并具有显著统计学意义(p<0.01),盐水组有轻微升高,不具有统计学意义；与模型组比较,银杏叶组与羟苯磺酸钙组全血粘度、血浆粘度都有所降低,都具有统计学意义(p<0.05)。银杏叶组与羟苯磺酸钙组比较全血粘度1s,血浆粘度差异具有统计学意义(p<0.05)。以上结果表明注射高分子右旋糖苷造成了血液流变学指标改变,并且银杏叶片和羟苯磺酸钙胶囊降低血浆粘度,西药在降低全血粘度(1s)和血浆粘度方面要略好于中药的作用。这可能由于高分子右旋糖苷诱发了微循环障碍引起的。4.2病理学结果HE染色,模型组：内膜不平滑、欠完整,可见隆起,内膜增厚,内皮细胞明显增多,内皮下层可见多量细胞聚集,内、外弹力板多处断裂,不连续,偶可见细胞穿行于断裂处；中膜平滑肌层细胞大小不一、胞核大小很不规整、排列方向紊乱；MASSON、EVG染色：中膜的胶原纤维明显增多,各层弹力纤维结构疏松、排列紊乱,多处分离、断裂,甚至消失,外弹力板多处断裂。生理盐水组出现了轻微病理改变。银杏叶组病理改变与模型组比较,有一定程度减轻,与羟苯磺酸钙组比较,病理改变略差。从HE染色,发现内膜下大量细胞聚集,至于这些细胞是什么,为验证是否为巨噬细胞,做了免疫组化染色,CD68是巨噬细胞表面特异性抗原,CD68的阳性表现为细胞浆染成棕黄色,研究表明动脉内膜下巨噬细胞大量表达,而对照组没有表达。表明尾静脉注射高分子右旋糖苷,导致了内皮下大量巨噬细胞的聚集,形成了As的早期病变。5实验结论统计显示尾静脉注射高分子右旋糖酐后,大鼠的血流变指标发生了相应改变,说明可能造成了微循环障碍；血常规检测结果表明未造成动脉的炎症改变,因此可以排除炎症对As模型的影响；血液生化检测指标表明未造成高血糖、高血脂的形成,排除其对As模型影响。病理结果：正常组动脉内膜未发生病理改变；生理盐水组产生了轻微的病理改变,这可能与注射刺激,应激有关；模型组、银杏叶组、羟苯磺酸钙组都形成As的早期病变,提示As模型成功建立；银杏叶片及羟苯磺酸钙胶囊对As起到了一定的预防作用,羟苯磺酸钙胶囊作用要略好于银杏叶片。