【摘 要】
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目的:本研究通过对大鼠中脑黑质部位注射TBK-1基因过表达载体对大鼠进行预处理,探究TBK-1对鱼藤酮（Rotenone,Rot）诱导的帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用以及相关分子机制,为寻找治疗帕金森病的靶向药物提供更多的实验依据。方法:SPF级Wistar雄性大鼠48只,分四组（n=12）:（1）空白组（contr ol group）;（2）PD模型组（Rot group）;（3）腺相关病
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目的:本研究通过对大鼠中脑黑质部位注射TBK-1基因过表达载体对大鼠进行预处理,探究TBK-1对鱼藤酮（Rotenone,Rot）诱导的帕金森病大鼠多巴胺能神经元的保护作用以及相关分子机制,为寻找治疗帕金森病的靶向药物提供更多的实验依据。方法:SPF级Wistar雄性大鼠48只,分四组（n=12）:（1）空白组（contr ol group）;（2）PD模型组（Rot group）;（3）腺相关病毒空载组（AAV-G FP+Rot group）;（4）腺相关病毒TBK-1过表达组（AAV-GFP-TBK-1+Rot group）;用脑立体定位注射仪向后两组大鼠中脑黑质部位分别注射2微升AAV-GFP空白载体和AAV-GFP-TBK-1过表达载体,3天后开始于大鼠颈背部进行皮下注射鱼藤酮工作液,在注射鱼藤酮工作液的第7、14、21、28天对各组大鼠进行旷场实验,观察TBK-1蛋白对行为学特征的影响;随后处死大鼠,并取黑质组织进行分子学实验,检测大鼠黑质部位小TH+神经元（多巴胺能神经元）数目、α-synuclein、胶质细胞活化标记物Iba-1、炎症因子IL-1β、TNF-α表达水平,以及RIPK-1蛋白表达情况。结果:1.旷场实验检测显示:与PD模型组大鼠相比,TBK-1过表达组大鼠5min内在旷场实验中穿越中央区域次数在第24天时显著增多（P<0.05）,表明TBK-1蛋白可以改善鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠的自主活动行为。2.免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR相关结果显示:与PD模型组大鼠相比,过表达TBK-1蛋白对鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠黑质中多巴胺能神经元的丢失可以起到一定程度的保护作用,同时其对鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠黑质中α-synuclein蛋白的异常沉积也有一定程度的抑制作用。3.免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR相关结果显示:与PD模型组大鼠相比,过表达的TBK-1蛋白能明显降低鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠黑质中小胶质细胞的活化水平。4.实时荧光定量PCR和Elisa蛋白定量检测结果显示:与PD模型组大鼠相比,过表达的TBK-1蛋白能显著降低鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠黑质炎症因子TNF-α的表达水平,轻度降低炎症因子IL-1β的表达水平。5.Western-blot检测和实时荧光定量PCR结果显示:与PD模型组大鼠相比,过表达的TBK-1仅能轻度抑制鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠中脑黑质RIPK-1蛋白的表达水平,但其能显著抑制RIPK-1蛋白相关位点磷酸化水平,即ser166-RIPK-1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论:1.TBK-1蛋白能改善鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠的自主活动功能。2.TBK-1对鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠中脑黑质中多巴胺能神经元具有一定程度的保护作用,对α-synuclein蛋白的异常沉积有一定程度的抑制作用。但有待增加样本量进一步证实。3.TBK-1蛋白能显著抑制鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠黑质中的小胶质细胞活化水平,并且降低了炎症因子TNF-α蛋白的表达水平。4.TBK-1蛋白减轻鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠的炎症反应的机制可能是通过抑制ser166-RIPK-1蛋白的磷酸化水平等途径实现。
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