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祖师麻味辛、苦,性温;有小毒;归肝经,具有祛风除湿、止痛散瘀的功效。主治风湿性关节炎、坐骨神经痛、类风湿关节炎、支气管炎、四肢痹痛、头痛、胃痛、跌打损伤等症。本研究目的在于确定祖师麻肠溶制剂的药理作用,为其临床应用提供实验依据。1祖师麻肠溶制剂对CCI大鼠的影响目的:研究祖师麻肠溶制剂对坐骨神经慢性挤压性神经损伤模型(CCI)大鼠的热缩足反射阈值(TWT)和机械性缩足反射阈值(MWT)以及脊髓和背根神经节(DRG)中ATP家族2型受体(P2X4)和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)受体的影响,探究祖师麻肠溶制剂治疗坐骨神经痛的机制。方法:结扎大鼠右侧坐骨神经,复制慢性挤压性神经损伤模型。术后第八天按MWT值以对位随机分配法分为10组,即对照组、假手术组、模型组、布洛芬组、祖师麻片1.584、0.792、0.396 g/kg 组、祖师麻肠溶制剂 1.584、0.792、0.396 g/kg 组。第八天开始灌胃给药,给药期间监测热缩足反射阈(TWT)、机械性缩足反射阈(MWT)的变化。给药14天后灌注取材,制作脊髓和DRG的免疫组化切片,观察P2X4和P38MAPK的表达情况。结果:①TWT值:从8d开始,与正常组比较,模型组大鼠出现热痛敏感的症状(P<0.01);与模型组比较,各给药组TWT值降低,有显著性差异(P<0.01)。②MWT值:从8d开始,与正常组比较,模型组大鼠出现机械痛敏的症状(P<0.01);从第8d给药到第14d开始,与模型组比较,各给药组MWT值降低,有显著性差异(P<0.01)。③脊髓免疫组化分析:与正常组相比,模型组脊髓背角处P38MAPK、P2X4受体阳性表达平均光密度显著增加(P<0.01);与模型组相比,祖师麻肠溶制剂1.584、0.792、0.396 g/kg及祖师麻片1.584、0.396 g/kg可明显降低模型大鼠脊髓背角P38MAPK、P2X4表达的平均光密度(P<0.05或P<0.01)。④DRG免疫组化分析:与正常组相比,模型组DRG中P38MAPK、P2X4受体阳性细胞数显著增加(P<0.01);与模型组比较,祖师麻肠溶制剂及祖师麻片各剂量组可明显降低模型大鼠DRG中P38MAPK、P2X4受体表达的阳性细胞数(P<0.01)结论:祖师麻肠溶制剂对结扎坐骨神经所致的坐骨神经痛具有明显的抑制作用。祖师麻肠溶制剂与祖师麻片对结扎坐骨神经所致的坐骨神经痛的抑制作用无明显差异。祖师麻肠溶制剂的镇痛作用与抑制P2X4和P38MAPK蛋白表达有关。2祖师麻肠溶制剂对AIA大鼠的影响目的:研究祖师麻肠溶制剂对弗氏完全佐剂诱导关节炎模型(AIA)大鼠的足肿胀率(FSR)、TWT、MWT以及ELISA血清指标及组织学的影响,探究祖师麻肠溶制剂对风湿性关节炎的干预作用。方法:足趾部皮内注射弗氏完全佐剂造模后,将大鼠分为9组,对照组、模型组、泼尼松组、祖师麻片1.584、0.792、0.396 g/kg组、祖师麻肠溶制剂1.584、0.792、0.396 g/kg组。造模后第二天开始灌胃给药,持续给药12d。在给药第7天、第12天检测大鼠FSR、TWT、MWT三个指标,末次给药后一天取血、踝关节和膝关节。酶联免疫分析法(ELISA)检测血清IL-6、TNF-α、PGE-2、IL-10和TGF-β的含量,光学显微镜下观察踝关节和膝关节病理学变化。结果:①FSR:与正常组相比,模型组在第7天和第12天均出现明显的差异(P<0.01);与模型组相比,各给药组在第12天均出现明显差异(P<0.01)。②TWT:与正常组相比,模型组在第7天和第12天均出现明显的差异(P<0.01);与模型组相比,各给药组在第7天和第12天均出现显著性差异(P<0.01)。③MWT:与正常组相比,模型组在第7天和第12天均出现明显的差异(P<0.01);与模型组相比,各给药组在第7天和第12天均出现显著性差异(P<0.01)。④血清生化指标:与正常组相比,模型组大鼠血清IL-6、TNF-α、PGE-2、IL-10、TGF-β的含量显著增加(P<0.01)。与模型组相比,祖师麻肠溶制剂各剂量可明显降低大鼠血清IL-10、TNF-α的含量,1.584、0.792 g/kg可明显降低大鼠血清PGE-2、TGF-β的含量,0.792、0.396 g/kg可明显降低大鼠血清IL-6的含量(P<0.01,P<0.05);祖师麻片剂各剂量可明显降低大鼠血清IL-6、IL-10的含量,1.584、0.792g/kg可明显降低大鼠血清PGE-2、TGF-β的含量,0.396g/kg可明显降低大鼠血清TNF-α的含量(P<0.01,P<0.05);⑤组织学观察:与正常组相比,模型组的踝关节和膝关节结缔组织间血管明显充血,炎细胞浸润明显,滑膜层增厚且侵蚀严重,软骨层和骨实质发生破坏;与模型组相比,各给药组均有显著改善,结缔组织间轻度充血,偶见炎细胞浸润,滑膜层基本光滑,软骨层和骨实质结构完整。结论:祖师麻肠溶制剂能可抑制弗氏完全佐剂所致大鼠的关节肿胀,减轻关节损伤。祖师麻肠溶制剂能可明显抑制弗氏完全佐剂所致的痛觉敏感。祖师麻肠溶制剂具有抗炎、镇痛作用。3祖师麻肠溶制剂对CIA大鼠的影响目的:研究祖师麻肠溶制剂对Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型(CIA)大鼠类风湿关节炎指数(AI)以及ELISA血清指标及组织学的影响,探究祖师麻肠溶制剂对类风湿性关节炎的干预作用。方法:两次尾根部注射牛Ⅱ型胶原蛋白(BCⅡ)乳化剂制作类风湿性关节炎模型。造模后20天,根据成模后AI评分,对位随机分配法分为9组(n=12),对照组、模型组、雷公藤多苷组、祖师麻片1.584、0.792、0.396 g/kg组、祖师麻肠溶制剂1.584、0.792、0.396 g/kg组。持续灌胃给药10天,每两天进行一次AI评分,末次给药后一天取血、踝关节和膝关节,ELISA 检测血清 IL-6、TNF-α、PGE-2、COX-2、CTGF、IgG、RF的含量,对踝关节和膝关节进行特殊染色,光镜下根据损伤进行评分。结果:①AI评分:与正常组相比,模型组给药期间内AI评分有显著性差异(P<0.01);与模型组比较,给药第10天,除祖师麻肠溶制剂0.396g/kg组以外,其余各组AI评分有明显的降低(P<0.05或P<0.01)。②血清生化指标:与正常组相比,模型组大鼠血清中 IL-6、TNF-α、PGE-2、COX-2、CTGF、IgG、RF 的含量显著增加(P<0.01 或P<0.05);与模型组相比,祖师麻肠溶制剂1.584、0.792 g/kg可明显减少大鼠血清中IL-6、TNF-α的含量,1.584g/kg明显减少血清中PGE-2的含量(P>0.05,P<0.01);祖师麻片各剂量组可明显减少大鼠血清中IL-6、PGE的含量,1.584 g/kg可明显减少血清中CTGF、IgG、RF、TNF-α 含量,0.792、0.396 g/kg 明显降低 COX-2 的含量(P<0.05 或P<0.01)。③踝关节病理评分:与正常组相比,模型组踝关节评分有显著性差异(P<0.01);与模型组比较,给药10天后,各给药组评分明显降低(P<0.05或P<0.01)。④膝关节滑膜病理评分:与正常组相比,模型组膝关节滑膜评分明显高于正常组(P<0.01);与模型组比较,给药10天后,祖师麻片剂1.584、0.396 g/kg及祖师麻肠溶制剂1.584、0.792 g/kg滑膜病理评分明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:祖师麻肠溶制剂可抑制Ⅱ型胶原诱导的关节肿胀。祖师麻肠溶制剂治疗类风湿性关节炎的作用与其抗炎作用有关。