目的中药注射剂的不良反应已受到人们的高度重视,过多地把“责任”推给吐温80的说法不能自圆其说。我们对吐温80在化学不稳定性方面的研究进行了文献整理和分析,认为,在进行中药注射剂不良反应的研究过程中,除了把作为溶质的中药化学成分和作为溶剂的吐温80纳入考虑的范畴外,还应该充分地考虑到中药化学成分和吐温80的相互作用的问题。由此,我们从含有吐温80的中药注射剂----鱼腥草注射液出发,对吐温80与中药化学成分之间是否会相互反应产生新物质进行了探索性研究。根据核磁共振氢谱(1H NMR)可以在溶液状态中比较全面地反映物质结构信息的性质,我们在吐温80与鱼腥草挥发油的混合溶液的1H NMR谱中发现了有新物质峰(δ8.30ppm峰)出现,而鱼腥草挥发油中的醛类化合物的醛基质子峰显著下降甚至消失。另外,我们同时发现,鱼腥草注射液的1H NMR中也出现了δ8.30ppm的物质峰,而醛基质子峰峰度极低。围绕鱼腥草注射液的1H NMR谱δ8.30ppm新物质峰的出现和醛基质子峰峰度降低的这个现象,我们考察了鱼腥草注射液中、吐温80与鱼腥草挥发油混合物中δ8.30ppm峰随时间、温度不同的变化情况,研究了δ8.30ppm峰新物质的溶解性质,考察了不同产家的吐温80对鱼腥草挥发油的影响,考察了多个化合物分别与吐温80混合后的1H NMR谱δ8.30ppm峰出现情况并进一步测定了月桂醛与吐温80的混合溶液的核磁共振二维谱,探索月桂醛与吐温80相互反应的最佳物质量比和最佳反应时间,考察了多个中药注射液的1H NMR谱δ8.30ppm峰出现情况并进一步进行了核磁共振二维谱的测定,考察吐温80中所含杂质对δ8.30ppm峰新物质生成的影响。希望通过我们的研究,对吐温80与中药化学成分的相互作用的规律有一个初步的认识。方法(1)文献：以吐温80为关键词,系统检索到目前为止的PubMed、Wiley Online Library、Science、ScienceDirec、Highwire、Biomed Central、CNKI等国内外多个数据库,引用42篇相关的参考文献,按有机化学反应的分类,对吐温80的不稳定性进行了文献的整理和综述。(2)核磁共振技术：采用400.17MHz频率的核磁共振仪,对化合物与吐温80的混合液进行检测,扫描16次,测定温度295K,溶剂D2O的化学位移为δ4.70ppm、CDC13的化学位移为δ7.26ppm,以信噪比来衡量质子峰的大小和反映被测物质的含量,对化合物与吐温80混合后的、H NMR谱与化合物本身、吐温80本身的’H NMR谱图数据进行比对,指认新产生的物质峰以及考察新物质峰的变化情况。(3)新物质稳定性考察：鱼腥草注射液一经生产出来就置于阴凉避光的室温(20℃)中放置,作为0月加速试验的样品。进行高温加速试验的注射液样品置于人工气候箱中,设定40℃恒温、75%RH恒湿条件下。在放置1月、2月、3月后,分别作为1、2、3月加速试验的样品。各样品在加速试验期满后,取出安瓿瓶,打开,直接冷冻干燥至干,粉末以0.5mL D20溶解,测定’H NMR。对出厂生产的鱼腥草注射液置于阴凉避光的室温(20℃)中放置3个月,作为室温贮存的样品。另外,部分样品放置于冰箱的冷藏箱中,设定温度为4℃,也放置3个月,作为低温贮存的样品。这2个样品在贮存期满后,打开安瓿瓶,冷冻干燥至干,粉末以0.5mL D2O溶解,测定’H NMR。(4)化合物研究：将购买的各个化合物和实验室自制的鱼腥草挥发油分别与吐温80混合,搅匀,逐滴加入0.5~0.6mL重水,边加边摇匀,室温放置48b,测定’H NMR。(5)中药注射液的研究：将买来的中药注射液进行冷冻干燥,取冻干粉约20mg用重水溶解,测定’H NMR。(6)吐温80中杂质的研究：分析吐温80中可能存在的杂质,选取对δ8.30ppm峰新物质形成影响比较大的杂质(月桂酸或油酸),与吐温80、月桂醛进行混合后,加入0.5mL重水,混匀后检测’H NMR。结果(1)文献中关于吐温80化学不稳定方面包括：水解反应、络合反应、自氧化反应、聚合反应、光降解反应和其它尚不明确的化学反应。(2)刚出厂合格的鱼腥草注射液的的’H NMR谱中的醛基峰几乎消失,出现了δ8.30ppm新物质峰,并且该新物质峰在鱼腥草注射液加速1个月明显升高,再加速2个月、3个月不再明显变化。在低温和室温放置3个月,两种情况下的新物质峰高度相当且都较低,但是高温放置3个月,新物质峰则出现明显升高。鱼腥草挥发油的’H NMR谱有明显的δ9.60ppm的醛基峰,没有δ8.30ppm物质峰,吐温80的1H NMR谱在6~10ppm范围都不出现物质峰,而鱼腥草挥发油与吐温80混合后的1H NMR谱中出现了δ8.30ppm物质峰,位于δ9.60ppm位移的醛基峰的降低或消失。将鱼腥草挥发油与吐温80的混合液室温放置5个月后检测1H NMR谱,新物质峰出现明显升高。(3)用乙醚萃取分离鱼腥草注射液,检测乙醚层和水层的1H NMR谱。δ8.30ppm峰新物质出现在水层,同时在该峰附近δ8.50ppm处又出现了一个新峰；乙醚层的谱图中有δ9.60ppm醛基峰,在δ8.30ppm及其附近没有出现任何物质峰。(4)选取来自国内外4个不同产家的吐温80分别与鱼腥草挥发油、不同的醛类化合物混合后检测1H NMR谱。4个产家有3家的吐温80与鱼腥草挥发油混合后产生了δ8.30ppm新峰,而没有产生δ8.30ppm峰的国药集团产的吐温80与醛类化合物混合后又产生了δ8.30ppm物质峰。(5)选取不同类型的40个化合物分别与吐温80混合后检测1H NMR谱。有34个化合物与吐温80混合后的1H NMR谱有异常峰出现,其中29个产生了明显的δ8.30ppm新物质峰,其它5个则产生了别的异常物质峰。薯蓣皂苷等6个化合物与吐温80混合后没有发生变化。月桂醛与吐温80的混合液的H-H COSY没有出现与δ8.30ppm峰相关的物质峰,其放置一个月后的的HMQC谱显示δ8.30ppm物质峰与166.3ppm的碳相关联。月桂醛与吐温80不同摩尔比混合(分别为0.1：1、0.33：1、1：1、3.3：1、10：1),室温放置0月、1月、2月,测定1H NMR谱；0月时,5个样品的醛基峰随月桂醛的浓度增大而升高,而产生的δ8.30ppm新物质峰高度相当；放置1个月后,醛基峰均明显降低,而δ8.30ppm峰明显升高,且信噪比都在8左右,并在δ8.10ppm处出现了异常峰；放置2个月后,醛基峰不再下降,δ8.30ppm新物质峰也不再升高,δ8.10ppm异常峰稍有升高。(6)对16个中药注射液(含有吐温80的注射液11个、不含吐温80的注射液5个)的1H NMR谱进行测定。复方当归注射液等11个含有吐温80的中药注射液,除莪术油注射液外,1H NMR谱图都产生了δ8.30ppm物质峰。红花注射液等5个不含吐温80的注射液也都产生了δ8.30ppm物质峰。对红花、野木瓜等6个中药注射液,测定了核磁共振二维谱,只有不含吐温80的丹参注射液和红花注射液产生了与δ8.30ppm峰相关的13C峰,其余4个注射液未见与δ8.30ppm峰相关的13C峰。经查阅相关文献数据,产生δ8.30ppm峰的物质可能是丹参注射液中的丹参酮Ⅰ和红花注射液中的腺苷。但是,板蓝根注射液也可能含有腺苷,但没有见到与δ8.30ppm峰相关的13C峰。(7)吐温80中的杂质可能有环氧乙烷、过氧化物等副反应产物,这些成分大多不稳定且有毒,在国家药典中是有明确含量限制的。吐温80中可能含有来自合成原料油酸、月桂酸等杂质,为此将月桂酸+吐温80+月桂醛、油酸+吐温80+月桂醛的两种混合物测定了’H NMR谱,可见δ8.30ppm峰并没有升高,放置一个月后再检测,δ8.30ppm峰也没有明显变化。结论(1)吐温80的稳定性和安全性是相对的。(2)吐温80会使鱼腥草挥发油中的醛类成分发生变化形成δ8.30ppm峰新物质,鱼腥草注射液也含有该新物质。该新物质的形成受温度的影响较大。(3)δ8.30ppm峰新物质为水溶性且具有对热不稳定的性质,用乙醚萃取后鱼腥草注射液的水层的氢谱图δ8.50ppm位移处出现一个新峰,很可能是δ8.30ppm峰物质在萃取挥干过程中发生了分解或异构的缘故。(4)δ8.30ppm峰新物质的产生与吐温80的产家或来源无关。(5)吐温80能使多数中药化合物形成δ8.30ppm峰新物质,也可能形成其他新物质物质峰；形成的δ8.30ppm峰很可能是一个孤立醛基质子峰：形成δ8.30ppm峰新物质的最佳反应物质量比为3.3：1,反应时间为三个月或以上(6)中药注射液’H NMR谱δ8.30ppm峰的产生与注射液是否含有吐温80没有必然的联系,不含吐温80的注射液中的δ8.30ppm峰的产生可能与其本身含有相关结构的化合物有关。(7)吐温80中的酸类杂质成分对δ8.30ppm峰新物质的生成影响不大。