多光谱法和分子对接技术研究几种抗微生物兽药与蛋白及DNA的相互作用机制

来源 :长春师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:ryan_cheng
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相互作用研究对筛选并设计高效兽药具有指导作用。本文采用多种光谱法及分子对接法研究了几种抗微生物兽药与蛋白及DNA的作用机制。采用光谱法和分子对接研究了磺胺氯吡嗪钠/马波沙星和牛血清白蛋白(BSA)/人血清白蛋白(HSA)的相互作用。结果表明,两种药物均静态猝灭BSA/HSA荧光且伴随着非辐射能量转移。通过计算获得结合常数(Ka)和结合位点数(n)(291 K,pH=7.40,磺胺氯吡嗪钠-BSA:Ka=4.85×10~4 L?mol-1,n=1.06;马波沙星-BSA:Ka=1.66×10~4 L?mol-1,n=0.99;磺胺氯吡嗪钠-HSA:Ka=9.45×10~4 L?mol-1,n=1.24;马波沙星-HSA:Ka=9.70×10~3 L?mol-1,n=0.94)。基于F?rster非辐射能量转移(FRET)理论得到了磺胺氯吡嗪钠与BSA和HSA的结合距离(r0)分别为3.32 nm和3.11 nm,马波沙星与BSA和HSA的r0值分别为4.28 nm和3.34 nm。热力学参数分析表明磺胺氯吡嗪钠与血清白蛋白主要通过静电引力相互作用,马波沙星主要通过氢键和范德华力与血清白蛋白自发结合。圆二色光谱法和红外光谱法表明了两种药物均使血清白蛋白的二级结构发生了改变。磺胺氯吡嗪钠和马波沙星均结合在蛋白的Sub-domain IIA位上。采用光谱法和分子对接研究了莫能霉素/氯羟吡啶与BSA/HSA的相互作用。荧光光谱和荧光寿命分析表明两种药物对血清白蛋白荧光猝灭过程为静态猝灭过程。计算得到Ka值,n值及r0值(291 K,pH=7.40,莫能霉素-BSA:Ka=5.42×10~4 L?mol-1,n=1.23,r0=1.88 nm;氯羟吡啶-BSA:Ka=4.96×10~4 L?mol-1,n=1.16,r0=2.53 nm;莫能霉素-HSA:Ka=3.22×10~4 L?mol-1,n=1.01,r0=2.19nm;氯羟吡啶-HSA:Ka=2.99×10~4 L?mol-1,n=1.00,r0=2.02 nm)。莫能霉素和氯羟吡啶二者主要以氢键和范德华力与血清白蛋白自发结合。莫能霉素和氯羟吡啶均结合在血清白蛋白Sub-domain IIA位上,均改变了血清白蛋白的二级结构。分子对接法与光谱法结果一致。利用光谱法、粘度法、熔解温度法、离子强度法、单双链DNA对比法及分子对接法研究了氟苯尼考与DNA的相互作用。粘度法显示随着氟苯尼考浓度的升高,DNA的粘度几乎不发生改变。熔解温度法显示单独DNA和氟苯尼考-DNA的熔解温度几乎没有差别。当NaCl含量增加时,氟苯尼考与DNA的荧光强度呈下降趋势。单双链DNA对比法表明氟苯尼考与单链DNA(ssDNA)结合的Ka值(3.57×10~3·L?mol-1)小于氟苯尼考与双链DNA(dsDNA)结合的Ka值(6.92×10~3 L?mol-1)。圆二色光谱法表明氟苯尼考的加入使DNA碱基堆积程度降低,螺旋度升高。红外光谱法表明氟苯尼考改变了DNA的二级结构。紫外-可见吸收光谱法表明DNA的加入使氟苯尼考呈现增色效应。实验结果均表明,氟苯尼考与DNA通过沟区结合模式发生结合。分子对接结果进一步说明氟苯尼考与DNA发生沟区结合。荧光光谱和荧光寿命分析表明DNA以静态猝灭方式猝灭氟苯尼考荧光。氟苯尼考与DNA在291 K,301 K和311 K温度下Ka值分别为6.92×10~3 L?mol-1,6.21×10~3 L?mol-1和5.61×10~3 L?mol-1。静电引力是二者相互作用的主导作用力。采用多种光谱法和分子对接研究了泰妙菌素和DNA的相互作用。圆二色光谱法表明药物的加入使得DNA碱基堆积程度增强,右手螺旋性减弱。粘度法、熔解温度法、离子强度法、单双链DNA对比法及分子对接法均表明泰妙菌素与DNA发生嵌插结合。泰妙菌素与DNA相互作用为静态猝灭过程。荧光法得出泰妙菌素与DNA在291 K,301 K和311 K时的Ka值分别为8.13×10~3 L?mol-1,6.31×10~3 L?mol-1和4.90×10~3 L?mol-1,紫外法得出291 K时二者Ka值为9.51×10~3 L?mol-1。
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