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目的:PAK4是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在多种肿瘤组织和细胞中高表达,与细胞增殖、周期、迁移等细胞学行为相关,但没有与自噬相关的研究。p53作为肿瘤抑制基因,在50%以上恶性肿瘤发生突变,不多的研究提示其与PAK4的作用相关。本研究通过检测PAK4低表达时上述细胞学行为及相关分子的改变,以探讨PAK4是否通过p53发挥作用及其机制。方法:应用NCBI官网比对并选定PAK4-RNAi靶点序列,构建质粒与慢病毒。用shControl、shPAK4质粒或慢病毒分别转染或感染HepG2细胞,构建PAK4低表达细胞株。应用MTT法、Transwell法、PI染色流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、细胞周期,免疫印迹法和免疫荧光法检测目的蛋白表达量。结果:HepG2细胞在传代后第1-4.5天处于对数生长期。质粒转染实验:在转染72 h时,shPAK4组PAK4表达量（0.53±0.28）较shControl组（1.33±0.05）降低（p<0.01）。在72 h、96 h、120 h时shPAK4组OD值（0.40±0.01、0.49±0.01、0.54±0.01）较shControl组（0.52±0.01、0.75±0.00、0.91±0.00）降低（p<0.05）。在转染72 h时,LC3-II表达量shPAK4组（1.78±0.17）较shControl组（0.65±0.07）高表达（p<0.0001）,但shControl组较Control组（0.06±0.01）表达量也增高（p<0.01）。慢病毒感染实验:在96 h时,GFP表达最强;shPAK4组PAK4表达量（0.08±0.03）较shControl组（0.76±0.06）显著降低（p<0.0001）。48 h、72h、96 h、120 h时shPAK4组OD（0.23±0.01、0.27±0.01、0.33±0.01、0.35±0.01）较shControl组（0.44±0.01、0.56±0.04、0.63±0.01、0.80±0.02）降低（p<0.05）。shPAK4组96 h时细胞迁移数（41.00±4.51）较shControl组（221.66±12.12）减少（p<0.0001）。细胞周期检测发现,shPAK4组72 h、96 h、120 h时,G2/M期（22.84%、18.19%、11.7%）较shControl组（3.04%、2.37%、1.97%）的细胞百分比增高（p<0.05）;48 h时,shPAK4组与shControl组差异无统计学差异。感染96 h时,p53、LC3-II表达量（0.89±0.04、1.28±0.12）较shControl组（0.72±0.04、0.05±0.02）增高（p<0.05）,mTOR、p-Akt表达量（0.86±0.04、0.63±0.06）较shControl组（1.11±0.10、0.76±0.04）降低（p<0.05）,p-p53、Akt差异无统计学意义（p>0.05）。shControl组与Control组以上各指标差异无统计学意义（p>0.05）。结论:HepG2在传代后第14.5天是最佳干预时间段。应用shPAK4慢病毒能有效构建PAK4稳定低表达的HepG2细胞株,且在感染96h时,感染效率最高。PAK4低表达可上调p53、抑制mTOR或抑制Akt/mTOR信号通路,从而抑制HepG2细胞增殖、阻滞细胞周期于G2/M期、抑制细胞迁移、激活细胞自噬。提示PAK4可做为抗肿瘤靶点,其机制与p53相关。