聚(2-乙基-2-噁唑啉)-胆固醇氯甲酸酯构建的多西紫杉醇pH敏感胶束的初步研究

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多西紫杉醇(Docetaxel,DOC)作为一种半合成的新型抗肿瘤疏水性药物,本文中为了提高DOC的利用率和减少毒副作用,利用聚(2-乙基-2-噁唑啉)-胆固醇氯甲酸酯(poly(2-ethyl-oxazoline)-cholesteryl methyl carbonate,PEOZ-CHMC)构建纳米胶束载药系统递送DOC。建立抗肿瘤药物DOC和荧光模型药物香豆素-6(Coumarin-6,C6)的含量测定方法,分别为高效液相色谱法和荧光分光光度法,并对两种模型药物的含量测定方法进行系统的方法学考察。DOC和C6分别在浓度1-60μg/m L和10-1000 ng/m L范围内线性关系良好,而且二者精密度和回收率均符合实验要求。采用芘荧光探针法测定聚合物胶束的临界胶束浓度(Critical Micelle Concentration,CMC),结果表明PEOZ-CHMC的CMC为9.26μg/m L(4.63×10-6mol/L)。采用薄膜分散法分别制备DOC-PEOZ-CHMC胶束(DOC-PEOZ-CHMC micelles,DOC-M)、PEOZ-CHMC空白胶束(blank micelles,BM)和C6-PEOZ-CHMC胶束(C6-PEOZ-CHMC micelles,C6-M)。葡聚糖凝胶柱离心法测定DOC-M和C6-M包封率分别为(60.1±2.4)%和(58.9±2.1)%,马尔文粒径测定仪测定两种载药胶束粒径分别为(122.42±1.0)nm和(141.77±0.9)nm。利用透射电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)和扫描电镜(Scanning Electron Microscope,SEM)观察胶束形态,可知胶束具有球形或类球形结构,表面光滑。红外光谱(Infrared Spectroscopy,IR)和x-射线衍射(x-ray diffraction,XRD)对冻干胶束制剂表征,结果表明成功制备载药胶束。胶束制剂与胎牛血清共孵育,评估胶束的稳定性,结果表明pH 7.4条件下胶束制剂的透光率没有显著性的下降,说明胶束在pH7.4胎牛血清中具有较好的稳定性。体外释放实验表明,24 h在pH 7.4和pH 6.4条件下,胶束中药物累积释放率分别为15%和72%,表明胶束具有一定的pH敏感性。HeLa细胞抑制实验结果表明,pH降低时载药胶束的细胞存活率明显降低,表明环境的低pH能够增加胶束的细胞摄取。倒置荧光显微镜和流式细胞仪结果表明,在不同pH值条件下,DOC-M的摄取率均高于游离DOC。pH降低时,DOC-M细胞摄取效果明显增强,表明胶束具有较好的pH敏感性。
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