【摘 要】
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目的：对青蒿素(ART)及其衍生物双氢青蒿素(DHR)、青蒿琥酯(AS)、蒿甲醚(AMT)体外/体内抗囊型包虫病药效作用进行综合评价，并探索此类药物抗囊型包虫病作用机制是否为产生活性氧(ROS)导致其DNA损伤，致使虫体死亡。方法：⑴对青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)体外抗囊型包虫病药效作用进行综合评价并对其药效作用机制进行初步探索①以DMSO为溶剂对照组，以H2O2为ROS阳性对照组，以阿苯达唑(ABZ)和硝唑尼特(NTZ)为药效双阳性对照，青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、A
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目的：对青蒿素(ART)及其衍生物双氢青蒿素(DHR)、青蒿琥酯(AS)、蒿甲醚(AMT)体外/体内抗囊型包虫病药效作用进行综合评价，并探索此类药物抗囊型包虫病作用机制是否为产生活性氧(ROS)导致其DNA损伤，致使虫体死亡。方法：⑴对青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)体外抗囊型包虫病药效作用进行综合评价并对其药效作用机制进行初步探索①以DMSO为溶剂对照组，以H2O2为ROS阳性对照组，以阿苯达唑(ABZ)和硝唑尼特(NTZ)为药效双阳性对照，青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)低中高剂量为给药干预组和各组加入活性氧清除剂甘露醇组。各组干预4天后收集样本，HE染色，进行病理观察；②使用透射电镜进行超微结构观察；③青蒿素及其衍生物各1LC50组加入甘露醇检测死亡率；④使用DHR123与细粒棘球蚴共培养法检测细粒棘球蚴体内ROS含量；⑤用彗星实验检测各实验组细粒棘球蚴DNA损伤程度；⑥用免疫组化法验证各实验组细粒棘球蚴损伤原因。(2)对青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)体内抗囊型包虫病药效作用进行综合评价并对其药效作用机制进行初步探索，通过Blisss法测定青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)的LD50值，并依据LD50值设计给药剂量。采用腹腔注射体外培养的细粒棘球蚴囊泡接种昆明白小鼠以制备包虫病模型并运用B超检测造模成功小鼠用于实验并分组；①以ABZ作为阳性药物，青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)低中高剂量灌胃给药途径干预30天后，考察囊湿重、抑囊率、囊泡数目和囊泡直径的权重评分、组织病理学检测、囊泡透射电镜。②收集各实验组小鼠血清和囊液进行生化指标检测。③囊壁免疫组化检测氧化损伤产物。结果：体外实验①细粒棘球蚴病理学观察显示青蒿琥酯组细粒棘球蚴顶突上的小钩脱落，角质层和生发层结构均遭到破坏；②透射电镜超微结构观察显示青蒿琥酯组细粒棘球蚴生发层出现大量脂滴,并且有异染色质出现；③与甘露醇联合药物干预组比较，青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)中剂量组与H2O2组死亡均具有统计学意义(P<0.05)；④检测ROS动态变化330min，青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)组细粒棘球蚴ROS含量升高程度明显高于阿苯达唑和硝唑尼特组，并具有一定的剂量依赖性；⑤与阿苯达唑、硝唑尼特组相比，青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)低中高剂量组OTM值均有显著性差异(P<0.01)。⑥体内结果：①对青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)体内抗囊型包虫病药效作用综合评价，经药物干预后，囊湿重、囊泡数目和直径的权重评分、肝组织的病理和囊泡透射电镜(TEM)超微结构结果均表明青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)对小鼠体内的包虫均有不同程度的抑制和破坏作用，肝组织病理学结果也显示青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)均能不同程度的改善肝组织汇管区周围的炎细胞浸润、肝细胞的水肿和坏死，且青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)高剂量组优于阳性药ABZ组。②与模型组相比青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)对实验小鼠血生化指标的影响为降低肝胆疾病诊断指标谷丙转氨酶(ALT)活力，结合胆红素(DBIL)和总胆红素(TBIL)含量，具有浓度依赖性；降低小鼠血清氧化还原比(GSH/GSSG )，升高小鼠囊液中超氧化物歧化酶含量(T-SOD)和过氧化损伤产物过氧化氢(H2O2)含量，使小鼠机体朝氧化态发展；同时升高小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。③囊壁免疫组化结论：青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)均对小鼠包虫病有治疗作用，且各高剂量组与联合用药组疗效明显优于ABZ；青蒿素(ART)及其衍生物(DHR、AS、AMT)抗囊型包虫病作用机制为产生ROS导致其DNA损伤，致使虫体死亡。本研究为青蒿素类药物抗包虫病作用靶点的筛选和抗包虫病新药开发奠定了基础。
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