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黄曲霉毒素(Aflatoxins,简称AFT)是目前已知作用最强的基因毒性物质和致癌物质,在高温、高湿环境下,极易产生且不易去除。我国药材种植、加工、运输、存储过程中,稍有不慎,极易染毒。本研究建立了适合于普遍植物药材进行黄曲霉毒素检测的IAC-HPLC法,并运用该法对福州各大药店的11种药材(甘草、当归、泽泻、山药、绞股蓝、鱼腥草、麦冬、枸杞子、三七花、红花、山楂)进行黄曲霉毒素污染调查,为完善的限量标准及检测方法提供科学参考。研究内容如下: 1.对中药材中黄曲霉毒素检测步骤的前处理、净化、衍生方式、色谱条件进行探索、优化,成功建立植物药材中检测黄曲霉毒素的高效液相法。该法以信噪比S/N=3∶1(N=噪声,S=被测物信号/单位体积)作为最低检出限。黄曲霉毒素AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的最低检测限分别为0.1、0.02、0.05和0.05μg/kg。以目前最严格的欧盟限量标准AFB1<2μg/kg,此方法能满足现在国际上越来越严格的黄曲霉毒素限量的检测要求。以甘草为基质,加标水平在0.5~8ng/mL范围内,线性方程为:YB1=37959X+669.33(r=0.9999);YB2=81720X+2225.8(r=0.9999);YG1=35430X+1821.6(r=0.9999);YG2=18884X+654.04(r=0.9999);除AFG2外加标回收率在62%~88%,其余加标回收率在74%~108%,日内和日间RSD为1.02~11.7%,1.53%~6.21%,结果证明该方法准确、可靠,适用于中药材中黄曲霉毒素的检测。 2.在黄曲霉毒素检测步骤中,净化是重要一环,本实验对净化用免疫亲和柱进行效能比较及最佳使用条件进行研究。本实验选用Vicam、Clover、Romer、华安麦科公司的这四种目前最常使用的黄曲霉毒素总量柱进行研究,结果表明:Vicam、Clover、Romer、华安麦科的黄曲霉毒素总量柱,最大承受AFB1的柱容量分别为:355ng、287ng、602ng、475ng。Romer的加标回收率好于其他,平均达107%。免疫亲和柱的上样的甲醇和乙腈耐受度分别在20%和10%以下;Cover和华安麦科公司产的IAC柱pH值在7.0是为吸附最优,Vicam和Romer公司产IAC柱pH值分别在7.2和7.4为吸附最优。各种品牌免疫亲和柱的重复利用中,活化时间均要求大于18小时。各品牌IAC柱均可重复使用1~3次且吸附率均在90%以上,3次重复使用后回收率不同程度减低,其中在吸附率可使用范围内,华安麦科公司的IAC重复使用次数可达到7次。 3.研究不同炮制方法对中药材中黄曲霉毒素含量的影响。实验结果表明:净制前后对比,黄曲霉毒素减少率达75%;加热炮制(炒制)对药材中黄曲霉毒素几乎没有影响;蜜制药材容易滋生黄曲霉毒素;酒制、盐制对药材,黄曲霉毒素均有不同的减少,但是无法彻底去除。