论文部分内容阅读
目的:本研究选择RASSF1A作为研究目标，探讨不同浓度的甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR(5-Aza-2’-deoxycytidine，5-氮杂-2’脱氧胞苷)干预骨肉瘤细胞系MG63后对其RASSF1A抑癌基因mRNA和蛋白表达及细胞增殖的影响。
研究方法:
(1)细胞增殖情况的检测:培养骨肉瘤MG63细胞，2-3天传代一次。取生长良好的细胞，分别用不同浓度剂量（0、5、10、50μmol/L）的5-Aza-CdR处理，处理不同时间(24h、48h、72h、96h)后，MTT法检测各组细胞的增殖情况。
(2)不同浓度5-Aza-CdR处理MG63细胞系后RASSF1A基因mRNA表达变化情况:培养骨肉瘤MG63细胞，并提取细胞总RNA，采用RT-PCR法扩增经不同浓度剂量（0、5、10、50μmol/L）5-Aza-CdR处理MG63细胞系72h后的细胞RASSF1A基因mRNA转录水平。
(3)不同浓度5-Aza-CdR处理MG63细胞系后RASSF1a蛋白的表达变化情况:细胞MG63分别用不同浓度剂量（0、5、10、50μmol/L）的5-Aza-CdR处理72h后，经0.2％胰酶处理，离心收集细胞，经western-blot检测MG63细胞系RASSF1a蛋白的表达水平。
结果:
(1)细胞增殖的变化:骨肉瘤细胞MG63经0-50μmol/L5-Aza-CdR诱导96h后，MG63细胞增殖减少，细胞生长速度明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。
(2)RASSF1A基因表达的变化:经0-50μmol/L5-Aza-CdR诱导72h后骨肉瘤细胞MG63的RASSF1A基因表达经RT-PCR及WB检测显著上调，与实验对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。
(3)RASSF1A基因表达的抑癌作用:研究中我们发现，5-Aza-CdR处理MG63细胞系后，细胞增殖速度明显下降，同时RASSF1A基因的转录及翻译水平明显上调。
结论:
骨肉瘤MG63细胞系经5-Aza-CdR的干预后，随着干预浓度的增加抑癌基因RASSF1A的mRNA及蛋白表达上升，同时MG63细胞的增殖速度下降。