【摘 要】
：
嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor T-Cell,CAR-T）是经基因工程技术改造的T细胞,可特异性识别肿瘤抗原并激活T细胞靶向杀伤肿瘤细胞。CAR-T细胞疗法是一种新型精准靶向肿瘤治疗技术,已经在血液肿瘤治疗上取得了巨大成功。然而,CAR-T细胞面对实体肿瘤治疗却不尽人意,主要的瓶颈问题包括靶抗原表达降低,CAR-T细胞的归巢问题以及在肿瘤组织持久性问题等。活
论文部分内容阅读
嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor T-Cell,CAR-T）是经基因工程技术改造的T细胞,可特异性识别肿瘤抗原并激活T细胞靶向杀伤肿瘤细胞。CAR-T细胞疗法是一种新型精准靶向肿瘤治疗技术,已经在血液肿瘤治疗上取得了巨大成功。然而,CAR-T细胞面对实体肿瘤治疗却不尽人意,主要的瓶颈问题包括靶抗原表达降低,CAR-T细胞的归巢问题以及在肿瘤组织持久性问题等。活化诱导的细胞死亡（Activation-induced cell death,AICD）可导致T细胞活化后大量凋亡,是导致CAR-T细胞持久性差的主要原因之一。因此,减少CAR-T细胞的凋亡是提高CAR-T细胞持久性的有效手段,可显著提高CAR-T细胞对实体肿瘤的治疗效果。B细胞淋巴瘤基因-2（B cell lymphoma-2,Bcl-2）对T细胞存活起着重要作用,特别是在T细胞活化后。研究表明,Bcl-2高表达可以有效抑制T细胞应对细胞因子饥饿（cytokine withdrawal）诱导的凋亡,进而提高T细胞抗肿瘤能力。我们假设,过表达Bcl-2可以提高CAR-T细胞抗凋亡能力,从而提高其持久性和抗肿瘤疗效。基于此,本研究首先构建了靶向人表皮生长因子受体突变体Ⅲ（Epidermal growth factor receptor variant Ⅲ,EGFRv Ⅲ）的二代EGFRv Ⅲ.CAR。其次,在此基础上构建了过表达抗凋亡基因bcl-2的EGFRv Ⅲ.CAR。为了便于后续检测,两种EGFRv Ⅲ.CAR都通过T2A共表达绿色荧光蛋白（GFP）,分别命名为:EGFRv Ⅲ.CAR和EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2。最后,比较两种CAR-T细胞体外和体内的抗肿瘤效果,主要研究方法和结果如下:1)构建并制备EGFRv Ⅲ.CAR T细胞和EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2 T细胞。根据人源Bcl-2序列合成全长基因,然后通过E2A序列将其串联在EGFRv Ⅲ.CART2A-GFP基因（简写为:EGFRv Ⅲ.CAR）下游,构建EGFRv Ⅲ.CAR-T2A-GFPE2A-Bcl2逆转录病毒质粒载体（简写为:EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2）,并包装逆转录病毒,制备EGFRv Ⅲ.CAR T细胞和EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2 T细胞,利用流式细胞术（FCM）检测T细胞转导率。结果发现,制备的EGFRv Ⅲ.CAR T细胞和EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2 T细胞的GFP阳性率分别为53.22±11.66%和51.50±12.54%,无明显统计学差异。2)实现Bcl-2在EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2 T细胞中高表达,显著提高CAR-T细胞的抗凋亡能力。将过表达Bcl-2的CAR-T细胞与对照CAR-T细胞以及未进行病毒转导的活化T细胞（n ATC）进行IL-2饥饿（IL-2 withdrawl）培养,结果表明,无细胞因子IL-2情况下,细胞培养至第7天EGFRv.Ⅲ CAR T细胞和n ATC细胞扩增倍数分别为0.15±0.06和0.03±0.02,而EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2 T则扩增倍数为0.54±0.07。体外长期无IL-2培养条件下,EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2 T在体外能存活45天。3)D-luciferaes法检测CAR-T细胞对肿瘤细胞的毒性作用,结果表明,EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2 T细胞对EGFRv Ⅲ阳性肿瘤细胞的杀伤显著高于对照组EGFRv Ⅲ.CAR T细胞。同时,体外连续杀伤实验结果显示,EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2T细胞比EGFRv Ⅲ.CAR T细胞面对重复抗原刺激,具有更强的细胞因子分泌水平、细胞增殖能力以及抗凋亡作用。4)裸鼠体内抑瘤实验表明,EGFRv Ⅲ.CAR.Bcl2 T细胞治疗组能显著抑制He La细胞瘤的生长,而且无明显的毒副作用。免疫组织化学检测肿瘤切片结果表明,EGFRv Ⅲ.CAR-Bcl2 T细胞具有更强的瘤内存活能力。综上所述,本研究中过表达Bcl-2可显著抑制CAR-T细胞的凋亡,显著增强CAR-T细胞对实体肿瘤的治疗效果,为CAR-T细胞治疗实体肿瘤提供了新的思路和理论基础。
其他文献
随着纳米技术的飞速发展,许多具有天然酶类似催化活性的纳米材料作为新兴人工酶在生物医学和环境保护领域受到了人们的极大关注。金属纳米颗粒（Metal nanoparticles,MNPs）作为经典的催化剂在催化领域得到了广泛的发展和应用。为了使MNPs获得更高的催化活性,通常利用双金属协同作用（如合成核壳、合金等结构的双金属纳米材料）来提高催化活性或减小纳米颗粒的尺寸以暴露更多的催化活性位点。然而,这
燃料电池汽车具有无污染、零排放等优点,是新能源汽车发展的重要方向之一,对于实现我国“2030碳达峰”和“2060碳中和”的重大战略目标有着重要的价值和意义。能量管理策略是燃料电池汽车的核心技术之一,显著影响燃料电池汽车动力性、经济性、安全性和耐久性。然而,现有燃料电池汽车能量管理策略大多沿用油电式混合动力汽车能量管理策略,侧重于考察燃料电池与动力电池的功率分配问题,忽略燃料电池功率输出时的动态响应
我国是农业大国,秸秆产量巨大,带来环境压力与安全隐患。利用生物技术将秸秆等生物质资源转化为人类社会需求量大的燃料、化工产品及饲料,可实现化工原料的“绿色化”,实现经济社会的可持续发展。其中,生物质转化为生物乙醇等燃料过程中的瓶颈技术之一是快速有效地将半纤维素转化为单糖。半纤维素与果胶是植物细胞壁含量次于纤维素的两种多糖,其结构非常复杂,其降解需要多种主链酶和侧链酶的协同作用,而GH43家族的水解酶
全球气候的变化,尤其是全球范围内氮沉降水平的加剧及氮素的时空分布不均严重地影响着外来植物的入侵进程。目前关于氮脉冲对外来入侵植物和本地植物生理生态影响及其内在机理的比较研究较为有限。因此,本研究拟分别结合不同氮沉降水平、光周期及竞争模式等层面,通过研究比较氮脉冲对外来入侵植物南美蟛蜞菊和本地蟛蜞菊表型生长、光合作用系统、抗氧化系统及植物内源激素配比的改变等方面,深入揭示氮脉冲对外来入侵植物南美蟛蜞
我国化学农药使用量位于世界首位,化学农药在保障粮食产量发挥了重要作用,但对生态环境和人类的健康形成潜在的威胁;同时,由于化学药剂的长期大量使用,病原菌耐（抗药性）药性不断增强对作物的安全生产形成巨大的威胁;解淀粉芽胞杆菌是重要的植物病害生防菌资源,其抑菌能力强,环境友好,目前微生物农药存在剂型老旧,效价不高等问题,本研究为了进一步提高生防菌的利用效率和防治效果,以解淀粉芽胞杆菌Lx-11为研究对象
随着经济日益向高质量发展方式的转变,我国政府、企业界及学术界均不约而同地将目光纷纷集中于社会责任领域,而古往今来,商业银行在一国中的核心和枢纽地位不容小觑,且考虑到其行业特殊性,社会各界对我国商业银行的社会责任也相应地提出了更高的要求。本文在利益相关者理论、资源依赖理论以及声誉资本理论的基础上,研究了2013年至2019年31家上市商业银行的社会责任承担情况对其自身财务绩效的影响。基于样本特点,选
随着我国经济飞速发展,人们的生活水平也显著提高,对肉类、蛋类和乳制品类的消费需求与日俱增,畜禽养殖业因此得到蓬勃发展。发展畜禽养殖业会产生大量的养殖废水,养殖废水中含有大量的磷和抗生素,直接排放会造成严重的环境污染。本研究致力于开发出一种吸附-催化功能的新型环境纳米材料,旨在同步去除废水中的磷和盐酸四环素（Tetracycline HCL,TC-HCl）。本文以g-C3N4为载体,与磷元素有特异性
腐食酪螨Tyrophagus putrescentiae（Schrank）（Acari:Acaridae）是一种世界性分布的粮储和食用菌害螨,寄主广泛,适应性强。近年来,随着食用菌周年化栽培规模的不断扩大,温暖湿润的栽培环境使螨害发生逐年加重,暴发频繁,严重威胁着我国食用菌的安全生产。腐食酪螨对食用菌产业的危害主要是取食影响食用菌的商品性状和产量并传播所携带的病原菌,造成大规模的经济损失。植食性昆
目的:观察MAPK4在炎症性肠病（IBD）模型中的表达变化,并初步探讨MAPK4敲除对IBD病理损伤的效应及相关机制。方法:1.常规利用含2%DSS的饮用水喂养WT（8-10周C57/B6L雄鼠）小鼠7天,再换水喂养6天,建立IBD实验动物模型;观察记录小鼠体重、疾病活动指数（DAI）和生存情况;分别于0、7天和13天分离结直肠组织并记录其长度;利用H＆E染色、阿利新蓝染色和糖原染色（PAS）评估
葡萄是世界上消费最多的水果之一,它们富含很多营养物质,如氨基酸、糖、有机酸和维生素,深受消费者的喜爱。但在采摘及运输过程中会受到青霉属（Penicillium sp）、曲霉属（Aspergillus sp）、根霉属（Rhizopus sp）等真菌的侵染,导致果实腐烂,失去商业价值。塔宾曲霉（Aspergillus tubingensis）是葡萄主要致病菌之一,不仅造成葡萄黑粉病,还产生赭曲霉毒素A