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近年来悬浮阵列芯片技术获得了长足的进展并以其无可比拟的高信息量、高通量、灵敏、快速、准确、微型化和自动化等特点而显示出了巨大威力,因此受到世界各国学术界和工业界的瞩目并在诸多领域成功获得了应用。但是在悬浮阵列芯片的检测方法中具有在片检测优势的显微成像检测技术却缺乏与之匹配的适用于高通量检测的微载体技术,从而限制了悬浮阵列芯片的进一步发展及推广应用。为此,本论文在国际上首次提出与高通量显微成像技术匹配的不倒翁微载体-即上部为平面、下部为弧面且重心位于下部弧面内的微载体,并在此基础上提出了易于制备、易于识别且编码数量巨大的凹/凸字符编码技术以期为悬浮阵列芯片的进一步发展打下基础。
本论文的具体工作如下:
(1)本论文第一部分首先采用模板法制备了聚丙烯酰胺不倒翁微载体、凹型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体和凸型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体,结果表明所有的不倒翁微载体均具有良好的不倒翁特性即在无外力作用下微载体的平面在上而其弧面在下。而且凹型及凸型字符编码均清晰易识别。其次是结合呼吸成形方法和匀胶技术制备了聚苯乙烯(PS)及其共聚物(PS/PMAA及PS/PMMA/PMAA)的有序多孔薄膜,结果表明通过控制材料极性、匀胶速度和环境温度能够有效控制有序多孔薄膜的孔径,该结果为多孔微纳米结构融入字符编码不倒翁微载体表面以增加其表面的比表面积提供了有益的参考作用。
(2)本论文第二部分首先采用双抗体夹心法利用荧光光谱优化了凸型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体的免疫检测条件。发现固定一抗的戊二醛的优化反应浓度为1%(v/v),而抗原孵育时间的最佳值为2h。其次本论文对比了凸型与凹型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体在免疫检测中的性能。其次本论文对比了凸型与凹型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体在免疫检测中的性能。结果表明抗原-抗体复合物在凸型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体的界面处聚集而呈现出较好的信号放大作用,而凹型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体则可能由于其凹型结构对液体组分与凹型字符界面处的反应有所抑制而难以识别。进一步的研究表明本论文所制备凸型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体在免疫检测中表现出了明显的特异性。并且在0.1ng/mL至1000ng/mL范围内,荧光强度与抗原浓度对数呈现出了良好的线性特征,表明凸型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体具有较宽的线性检测范围,并且微载体检测的下限达0.1ng/mL,这些均表明本论文研究的凸型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体可望构建性能优良的悬浮阵列芯片。
(3)本论文第三部分首先借助于Image-Pro Plus软件及Image J软件探讨了荧光图像定量分析技术在Cy3标记凸型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体免疫检测中的应用。结果表明,通过荧光图像定量分析技术所获得免疫检测结果与通过荧光光谱所获得的免疫检测结果类似,提示其在凸型字符编码不倒翁微载体悬浮阵列芯片中应用的可行性;进一步对比荧光光谱法及两种荧光图像定量分析技术在免疫检测中效果可以发现荧光图像定量分析技术不仅可以有效去除微载体背景荧光信号的干扰,而且它能够突出本论文所研究凸型字符编码不倒翁微载体凸型字符边界的信号放大作用而提高免疫检测分析工作曲线的斜率,从而可望提高其检测灵敏度及检测的准确性。其中。Image J软件处理法由于主要提取了凸型字符界面处的荧光强度信息,从而进一步凸显了凸型字符界面处高荧光强度部分在有效荧光强度中的比重而优于Image-Pro Plus软件提取全部凸型字符表面的荧光强度的方法。提示荧光图像定量分析技术在凸型字符编码聚丙烯酰胺不倒翁微载体悬浮阵列芯片中应用的巨大潜力。