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目的:探讨B7-H4分子介导间充质干细胞移植对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型体内免疫微环境的影响及其可能的作用机制。方法:采用髓鞘少突胶质糖蛋白肽(MOG35-55)等诱导小鼠EAE模型,开展绿荧光蛋白(GFP)标记的小鼠间充质干细胞株C3H10 T1/2(简称C3H10)细胞移植干预实验。将小鼠随机分成5组:正常对照组,EAE组(免疫后1周,注射100μl PBS),C3H10组(免疫后1周移植C3H10细胞1×10~6cell/只),C3H10-B7H4组(免疫后1周移植C3H10-B7H4细胞(B7-H4靶向shRNA转染的C3H10细胞)1×10~6cell/只),C3H10-NC组(免疫后1周移植C3H10-NC(转染空质粒的C3H10)细胞1×10~6cell/只)。观察指标:1)每天对各组小鼠进行神经功能评分;在发病恢复期(依据评分设定为免疫后35天)收集各组小鼠脊髓组织,荧光显微镜下观察脊髓内GFP~+移植细胞的迁移及存活情况;在发病高峰期(依据评分设定为免疫后20天)采用Fast Blue染色观察髓鞘脱失,CC1和GFAP等免疫荧光染色观察轴突损害以及神经胶质细胞的反应;并采用HE染色和免疫荧光染色等方法,检测炎性细胞浸润程度及炎细胞组成,以及负性共刺激分子PD-L1和B7-H4的表达。2)对各组视神经进行解剖观察,并通过病理学检测视神经炎性细胞浸润和髓鞘脱失,同时进行视网膜形态学观察及厚度检测,并分析视网膜神经节细胞的凋亡坏死情况。3)发病高峰期对各组小鼠外周血和脾脏B细胞及亚群进行检测,同时观察脾脏淋巴滤泡生发中心的变化及T、B细胞的分布情况。结果:1)神经功能缺损评分显示小鼠间充质干细胞C3H10移植可明显缓解EAE小鼠的临床症状,延迟发病时间,降低神经功能缺损评分,而下调C3H10细胞上B7-H4的表达,该治疗作用明显减弱。干细胞移植示踪显示C3H10可迁移至脊髓病变组织内并存活。除正常对照组外各组脊髓组织内均出现炎性细胞浸润、髓鞘脱失及胶质细胞增生的表现,但C3H10组和C3H10-NC组炎性细胞浸润、髓鞘脱失及胶质细胞增生的程度明显较C3H10-B7H4组和EAE组轻,负性共刺激分子PD-L1和B7-H4阳性细胞数量也明显较EAE模型组和C3H10-B7H4组多。2)镜下各组小鼠视神经病理观察显示:C3H10-B7H4组与EAE组相似,视神经存在轻度水肿,尤其以包膜层水肿明显,而C3H10组及C3H10-NC组与正常组无明显差异。病理染色发现MOG诱导后各组视神经组织均出现炎性细胞浸润、髓鞘脱失、轴突损害及神经节细胞凋亡的表现,C3H10-B7H4组与EAE模型组类似,炎性细胞浸润、髓鞘脱失、轴突损害及神经节细胞凋亡的程度均较重,而C3H10组或C3H10-NC组较EAE组轻。视网膜厚度及双极细胞厚度检测发现EAE组较正常组明显变薄,下调B7-H4后其厚度与EAE组无差异,而C3H10组及C3H10-NC组可明显抑制视网膜萎缩变薄。3)在发病高峰期各组小鼠外周血中B淋巴细胞的比例相似,而脾脏细胞中EAE组B细胞比例与C3H10-B7H4组相似,较正常对照组低,而C3H10移植治疗后脾脏B细胞比例与正常组相似。外周血和脾脏记忆细胞和浆细胞分布差异分析显示,在EAE模型组,记忆B细胞和浆细胞主要分布于脾脏,C3H10移植治疗后显示,记忆细胞分布存在统计学差异,而浆细胞无统计学差异,下调B7-H4分子后,记忆细胞和浆细胞分布差异无统计学意义。组织形态学发现EAE组脾脏较正常组明显增大,余各组均有轻度增大,但均小于EAE组。病理学发现MOG诱导后各组脾脏淋巴滤泡生发中心均明显增大,EAE组脾脏生发中心较其它处理组明显增大,中心可见大量T细胞浸润,与B细胞混杂存在,C3H10组和C3H10-NC组脾脏淋巴滤泡生发中心内可见大量B细胞聚集,同时也存在T淋巴细胞浸润,但与EAE组相比,数量明显减少,然而C3H10-B7H4组与模型组类似,均可见大量的T、B细胞浸润。结论:1)C3H10移植可减轻EAE病情,延缓发病,而B7-H4介导了其保护作用;干细胞移植后可在病变组织内存活,B7-H4介导C3H10的免疫保护作用,与其参与抑制炎性细胞浸润、髓鞘脱失及胶质细胞增生,影响组织内负性共刺激分子PD-L1和B7-H4的表达,调节脊髓、视神经等病变组织内微环境,为保护神经细胞,促进髓鞘及轴突修复和再生提供适宜的微环境有关。2)干细胞移植可抑制视神经内炎性细胞浸润、髓鞘脱失、轴突损害及神经节细胞凋亡,防止视网膜萎缩,从而保护多发性硬化相关视神经损伤。干细胞表达的B7-H4分子参与保护髓鞘和轴突损伤,抑制神经节细胞和双极细胞的凋亡、坏死,保护视网膜内神经元阻止视网膜变薄。3)B细胞作为抗原递呈细胞引发T细胞活化,引起脱髓鞘疾病的发生,参与EAE发病。B7-H4介导间充质干细胞对EAE的治疗作用可能与抑制B细胞等作为抗原递呈细胞提呈抗原,激活T细胞,抑制记忆B细胞和浆细胞分化有关。