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太湖猪是我国珍贵的地方品种资源,具有性情温驯、肉质鲜美、耐粗饲、杂种优势显著、抗病力强等优良特性,以产仔数多而闻名世界。深入研究太湖猪的高繁殖性能分子机理,对于培育新品种、提高猪种繁殖性能具有重要意义。为了进一步揭示太湖猪高繁性能的分子机理,本文采用实时荧光定量PCR技术对太湖猪和商品猪卵巢组织中FSHR基因mRNA表达水平进行了比较分析,并对FSHR基因mRNA表达水平与太湖猪产仔数的相关性进行了分析;通过PCR扩增和克隆测序技术获得了太湖猪FSHR基因夕调控区序列,采用各种生物信息学软件分析了太湖猪FSHR基因的5调控区的序列特征;采用PCR一SSCP技术检测太湖猪和商品猪FSHR基因5’调控区的SNP位点,对太湖猪和商品猪FSHR基因5调控区的多态性进行了比较分析,并分析了商品猪FSHR基因5’端调控区多态性与卵巢组织FSHR基因表达水平的关联性。分析结果如下:
1.FSHR基因在成年二花脸猪卵巢组织中高表达,在输卵管和子宫组织中低表达,而在其它组织中不表达;成年二花脸猪卵巢组织中FSHR基因mRNA表达量高于商品猪,两者差异显著(P=0.017);相关性分析发现,二花脸猪FSHR基因mRNA表达量与经产平均产仔数呈显著正相关(P<0.05),相关系数为0.8246,与经产平均产活仔数呈显著正相关(P<0.05),相关系数为0.8167,说明卵巢组织FSHR基因mRNA表达量与二花脸猪产仔数之间存在一定的关系。
2.通过PCR扩增和克隆测序获得了梅山猪FSHR基因5’调控区序列,序列全长为1180bp,与引物源序列、牛、山羊、小鼠和人的同源性分别为99.75%、67.17%、64.86%、36.49%和33.56%。通过软件预测发现6个启动子序列,其中有4个启动子预测分值最高,集中分布在25nt-369nt,并且在这一区域存在15个转录调控元件(分值大于或等于85),分别是AML-la、CdxA、caP、SRY、S8、Oct-l、GATA-l、HSF2、TCFll、GATA-2、GATA-3和TATA等。
3.通过PCR-SSCP技术在梅山猪群FSHR基因5’调控区中发现2个突变位点:在nt1001处碱基A突变为T;nt334处碱基A突变为G,导致DD型梅山猪FSHR基因的5’端调控区的一个调控元件GATA-1的结构组成发生改变,预测分值升高。通过比较分析梅山猪和商品猪两个位点的多态性,结果表明,在A1001T位点,等位基因A和基因型AA为梅山猪的优势等位基因和基因型,频率分别为0.6223和0.4681,高于商品猪(分别为0.3953和0.2093);在A334G位点,梅山猪等位基因D和基因型DD的频率分别为0.3368和0.3053,高于商品猪(分别为0.2349和0.1807)。有效等位基因数、杂合度与多态信息含量统计分析结果表明,2个猪群2个位点均为中度多态位点。
4.采用实时荧光定量PCR技术检测了不同基因型商品猪卵巢组织中FSHR基因mRNA表达水平,结果发现:在A1001T位点,AB型商品猪卵巢组织中FSHR基因mRNA表达量最高,其次为AA型,BB型表达量最低,但3种基因型之间差异均不显著;在A334G位点,DD型卵巢组织中FSHR基因mRNA表达量显著高于CC型和CD型(P<0.05),而CD型高于CC型,但两者异不显著。研究结果表明,FSHR基因5调控区A334G突变可能影响FSHR基因mRNA的表达。
1.FSHR基因在成年二花脸猪卵巢组织中高表达,在输卵管和子宫组织中低表达,而在其它组织中不表达;成年二花脸猪卵巢组织中FSHR基因mRNA表达量高于商品猪,两者差异显著(P=0.017);相关性分析发现,二花脸猪FSHR基因mRNA表达量与经产平均产仔数呈显著正相关(P<0.05),相关系数为0.8246,与经产平均产活仔数呈显著正相关(P<0.05),相关系数为0.8167,说明卵巢组织FSHR基因mRNA表达量与二花脸猪产仔数之间存在一定的关系。
2.通过PCR扩增和克隆测序获得了梅山猪FSHR基因5’调控区序列,序列全长为1180bp,与引物源序列、牛、山羊、小鼠和人的同源性分别为99.75%、67.17%、64.86%、36.49%和33.56%。通过软件预测发现6个启动子序列,其中有4个启动子预测分值最高,集中分布在25nt-369nt,并且在这一区域存在15个转录调控元件(分值大于或等于85),分别是AML-la、CdxA、caP、SRY、S8、Oct-l、GATA-l、HSF2、TCFll、GATA-2、GATA-3和TATA等。
3.通过PCR-SSCP技术在梅山猪群FSHR基因5’调控区中发现2个突变位点:在nt1001处碱基A突变为T;nt334处碱基A突变为G,导致DD型梅山猪FSHR基因的5’端调控区的一个调控元件GATA-1的结构组成发生改变,预测分值升高。通过比较分析梅山猪和商品猪两个位点的多态性,结果表明,在A1001T位点,等位基因A和基因型AA为梅山猪的优势等位基因和基因型,频率分别为0.6223和0.4681,高于商品猪(分别为0.3953和0.2093);在A334G位点,梅山猪等位基因D和基因型DD的频率分别为0.3368和0.3053,高于商品猪(分别为0.2349和0.1807)。有效等位基因数、杂合度与多态信息含量统计分析结果表明,2个猪群2个位点均为中度多态位点。
4.采用实时荧光定量PCR技术检测了不同基因型商品猪卵巢组织中FSHR基因mRNA表达水平,结果发现:在A1001T位点,AB型商品猪卵巢组织中FSHR基因mRNA表达量最高,其次为AA型,BB型表达量最低,但3种基因型之间差异均不显著;在A334G位点,DD型卵巢组织中FSHR基因mRNA表达量显著高于CC型和CD型(P<0.05),而CD型高于CC型,但两者异不显著。研究结果表明,FSHR基因5调控区A334G突变可能影响FSHR基因mRNA的表达。