【摘 要】
：
艰难梭菌（Clostridium difficile,C.diff）是广泛存在于环境及各种动物体内,能够引起腹泻,伪膜性肠炎等疾病的条件致病菌,严重威胁人类健康和养殖业安全生产。而ST11型艰难梭菌目前是国际范围内流行最为广泛,危害最大的亚型之一。所以本研究旨在表达ST11型艰难梭菌Tcd B毒素蛋白受体结合区域（RBD）,筛选针对ST11型Tcd B RBD的单克隆抗体,并利用该抗体初步建立用于
论文部分内容阅读
艰难梭菌（Clostridium difficile,C.diff）是广泛存在于环境及各种动物体内,能够引起腹泻,伪膜性肠炎等疾病的条件致病菌,严重威胁人类健康和养殖业安全生产。而ST11型艰难梭菌目前是国际范围内流行最为广泛,危害最大的亚型之一。所以本研究旨在表达ST11型艰难梭菌Tcd B毒素蛋白受体结合区域（RBD）,筛选针对ST11型Tcd B RBD的单克隆抗体,并利用该抗体初步建立用于检测ST11型艰难梭菌Tcd B毒素的双抗体夹心ELISA方法。首先,成功构建了能表达ST11型Tcd B rbd大肠杆菌。以大肠杆菌BL21（DE3）作为表达菌,p ET-32a（+）作为表达载体,将Tcd B RBD（1848bp）基因片段插入载体中,经终浓度为1m M的IPTG诱导4h后,重组大肠杆菌能够表达大小约为97KD左右的重组RBD蛋白。其次,成功筛选了能够分泌针对ST11型Tcd B RBD单克隆抗体的杂交瘤细胞。经重组RBD蛋白免疫后小鼠,抗体效价均达到了1:51200,通过杂交瘤技术,获得1株克隆化阳性的杂交瘤细胞AE2D3,亚型鉴定结果为Ig G2b（κ）,采用辛酸-硫酸铵粗提和Protein G凝胶亲合层析法对腹水进行纯化,纯度在90%以上,浓度为0.743mg/ml,经Western blot验证为抗RBD特异性抗体。最后,成功建立了可用于检测ST11型艰难梭菌Tcd B毒素的双抗体夹心ELISA方法。最佳反应条件为0.05m M碳酸盐包被1:1600多抗37℃1h+4℃过夜孵育,3%脱脂牛奶37℃封闭1h,加入待检样品后加入AE2D3检测抗体0.23ug37℃孵育1h,最后加入HRP酶标二抗37℃孵育0.5h后显示10分钟读数。利用该方法检测临床分离ST11型艰难梭菌阳性率为100%,其他对照样本全为阴性。该检测方法具有很高的特异性和良好的敏感性。
其他文献
匍匐翦股颖（Agrostis stolonifera）为禾本科翦股颖属多年生草本植物,是一种优良的冷季型草坪草,具有绿期长、匍匐性强、质地细腻和耐低修剪等特点,广泛应用于园林绿化和高尔夫球场草坪等领域。但匍匐翦股颖耐热性较差,夏季高温导致草坪质量下降的问题突出。本试验以广泛应用的‘penncross’匍匐翦股颖为研究对象,2017年5月28日到8月7日和2018年6月9日到9月8日期间,在已成坪的
在“互联网+”的背景下，互联网等信息技术与教育不断融合造就了在线教育。但在线教育主要集中于K12领域，近期“双减”政策的出台使传统的中小学在线教育进入寒冬，但职业在线教育却迎来了全新发展空间，如以财经领域为主要业务的高顿教育。文章主要以高顿教育为主，基于PEST分析与SWOT分析其现状与营销环境，基于4P理论分析其营销策略，探究高顿如何在在线教育中有进一步的发展。
(目的)中草药作为常见的免疫增强剂,能够提高机体免疫能力和抗病能力,可用于水产养殖疾病防治药物和饲料添加剂,其开发、研制与应用也受到越来越多学者的关注。玛卡作为中草药的一种,具有提高生育能力、抗疲劳、抗氧化、增强免疫力、迅速恢复体力等多种功效。为探究玛卡作为饲料添加剂和免疫增强剂在水产养殖上的潜在应用和价值。（方法）本试验以草鱼为研究对象,通过饲喂含有不同水平玛卡（0,0.2,1.0,5.0,10
【目的】帕金森疾病（Parkinson,PD）是对全球中老年人危害极大的神经退行性疾病,仅次于老年痴呆病,PD理想动物模型应表现出运动功能障碍和多巴胺能变性病理学,但是已知模型并未完全满足其特征。PD病人大脑黑质铁含量明显增加,脑内铁参与Fenton反应导致氧化应激与PD发病机制密切相关,因此本实验利用柠檬酸铁连续干预C57BL/6小鼠16周,从小鼠行为学、组织铁含量、病理变化及氧化应激着手,探究
亚临床坏死性肠炎（SNE）广泛存在于肉鸡中,通过降低生长性能来引起严重的经济和社会问题。本研究基于约氏乳杆菌BS15的分子调控机制,以及其对SNE感染肉鸡的肝脏炎症通路的影响,探讨SNE对肝脏炎症的分子机制,并研究约氏乳杆菌BS15对SNE的预防作用。将180只（Cobb 500）肉鸡分成3组,提供饮食如下:第1组作为正常对照（NC）饲喂基础日粮,第2组作为SNE对照（SNE实验模型）饲喂基础日粮
本论文以肉鸡为研究对象,旨在研究日粮中添加约氏乳杆菌BS15对亚临床坏死性肠炎（SNE）肉鸡脂质代谢和肠道菌群的影响。试验选用1日龄科宝500雄性健雏180只,随机平均分为3组:空白对照组（NC组）,造模组（SNE组）,约氏乳杆菌BS15预防组（BS15组）。肉鸡共饲养28天。BS15组饲喂添加活菌数为1.0×10~9 cfu/m L的约氏乳杆菌BS15全菌液拌料。15日龄时,SNE组和BS15组
临床型乳房炎严重影响和制约了奶牛养殖业的健康发展。目前国内外防治该病主要以抗生素为主,不仅会导致乳汁抗生素残留、疗效下降、抗生素用量升高和耐药菌株产生等问题,还严重影响人们的身体健康,极易引起乳品安全公共事件。而白头翁及其提取物白头翁皂苷同时具备抗炎、抑菌、抗氧化和提升免疫等药效,与乳房炎清除细菌、缓解炎症、提高自身免疫力以帮助自愈的治疗需求密切相关。因此,探究白头翁皂苷对奶牛乳房炎的疗效及其作用
紫茎泽兰（Ageratina adenophora）是我国危害最严重的外来入侵植物之一。研究表明紫茎泽兰提取物具有多种生物学活性,其中紫茎泽兰中隐绿原酸（4-O-caffeoylquinic acid）的抗炎活性少有研究。本文从紫茎泽兰甲醇提取物的水相部分中分离出一种单体化合物,利用超高效液相色谱法进行纯度检测,并通过CCK-8法筛选合适的用药浓度后,最后采用硝酸还原法、ELISA法、RT-PCR
鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,RA）是一种革兰阴性菌主要感染鸭等多种禽类,给养鸭业带来巨大的经济损失。本研究解析铁摄取调节子—Fur在鸭疫里默氏菌中所具备的功能,并评价该缺失株作为基因缺失弱毒苗的潜力,主要结果如下:1.fur基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备首先根据RA CH-1基因组上的fur基因序列将其扩增并克隆于表达载体p ET32a上;随后将重组质粒导入
多杀性巴氏杆菌是一种重要的畜禽病原菌,可引起多种动物的接触性传染病,如禽霍乱。脂多糖（LPS）表达于细菌外膜,由类脂A、内核心寡糖、外核心寡糖三个部分组成,其中外核心寡糖结构具有多样性。前期研究表明外核心寡糖的完整性会影响细菌对禽类抗菌肽的抵抗力以及在鸡上的毒力。本研究进一步解析外核心寡糖结构对多杀性巴氏杆菌在极端环境下的存活及在鸭群上的致病性的影响。1多杀性巴氏杆菌缺失株的构建与鉴定通过自杀质粒