目的:1.研究顺铂舒张大鼠离体胸主动脉血管环中PKC的作用及机制,并探讨PKC参与顺铂抗肿瘤作用的机制。2.研究顺铂舒张大鼠离体胸主动脉血管环的其他作用机制。方法:1.分离出SD大鼠的胸主动脉,采取离体血管环灌流装置观察顺铂对大鼠血管环基础张力以及1×10^-6mol/L PE或60 mmol/L KCl预刺激收缩血管后顺铂的舒张作用,并孵育不同的抑制剂,探讨其可能的作用机制。2.分离胸主动脉,采取离体血管环灌流装置在1×10^-6mol/L PE预刺激收缩血管后,采用1×10^-4mol/L浓度顺铂舒张血管后,收集血管环组织,检测其组织中NO含量和eNOS、iNOS蛋白表达情况。3.收集对数期的MCF-7细胞,计数,调整细胞悬液的浓度,使用96孔板,种板24 h细胞贴壁后给药。细胞给药分组为空白对照组,阴性对照组,顺铂12 h给药组,顺铂12h+PKC激动剂PMA 12 h组,顺铂12 h+PKC抑制剂SP 12 h组。细胞孵育完成后,每孔加入20μL CCK-8试剂液培养2 h,后在酶标仪检测其OD（450nm）值。并使用Western Blot法检测上述各组细胞中iNOS和eNOS蛋白表达情况。结果:1.累积浓度顺铂和对照药卡托普利均(1×10^-7、1×10^-6、3×10^-6、1×10^-5、3×10^-5、1×10^-4mol/L)对基础状态时的血管张力无明显影响,但对1×10^-6mol/L PE或60mmol/L KCl引起收缩的血管具有浓度依赖性的舒张作用,且内皮完整组舒张作用强于去内皮组。2.一氧化氮合酶抑制剂L-NAME(1×10^-4mol/L)孵育血管后,顺铂和对照药卡托普利的舒张作用均部分被抑制（P<0.05）。3.PKC激动剂佛波酯PMA(1×10^-7mol/L)孵育血管后,顺铂和对照药卡托普利的舒张作用均部分被抑制（P<0.05）,而PKC抑制剂十字孢碱（3×10^-88 mol/L）孵育血管后,顺铂和对照药卡托普利的舒张作用均增强（P<0.05）。4.顺铂可促进大鼠胸主动脉血管环产生NO。与顺铂组相比,加入PKC抑制剂SP,血管中NO的释放量增加（P<0.05）,而加入PKC激动剂佛波酯PMA后,血管中NO的释放量明显下降（P<0.01）。5.顺铂可使大鼠胸主动脉血管组织中eNOS蛋白水平增加（P<0.01）,iNOS蛋白水平无明显变化。孵育PKC抑制剂会使顺铂组eNOS蛋白水平升高（P<0.05）,iNOS蛋白水平无变化;而孵育PKC激动剂则使eNOS蛋白水平下降（P<0.01）,iNOS蛋白水平没有发生改变。6.顺铂对MCF-7乳腺癌细胞具有抑制作用,且加入PKC抑制剂SP后,顺铂对MCF-7细胞抑制作用明显增强（P<0.05）,而加入PKC激动剂佛波酯PMA后,顺铂对MCF-7细胞抑制作用显著减弱（P<0.05）。7.顺铂可促进MCF-7细胞产生NO。与顺铂组相比,加入PKC抑制剂SP,MCF-7细胞对NO的释放量增加（P<0.01）,而加入PKC激动剂佛波酯PMA后,MCF-7细胞对NO的释放量下降（P<0.05）。8.顺铂可使细胞中i NOS的蛋白水平增加,eNOS蛋白水平无变化。与顺铂组比较,孵育PKC抑制剂SP后,细胞中iNOS表达水平更高（P<0.01）,而孵育PKC激动剂佛波酯PMA后细胞中iNOS表达水平降低（P<0.01）。9.COX抑制剂Indo(1×10^-5mol/L)孵育血管后,顺铂的舒张作用部分被抑制（P<0.05）。10.本实验无钙条件下,KCl预刺激,孵育顺铂后抑制了2.5 mmol?L^-1CaCl₂引起的血管平滑肌收缩（P<0.05）。11.顺铂(1×10^-6、1×10^-5、1×10^-4mol?L^-1)会浓度依赖性的抑制2.5 mmol?L^-1CaCl₂产生的收缩,与未孵育顺铂组相比,有显著差异（P<0.05）。12.抑制K_Ca通道及K_ATP通道可抑制顺铂的舒张作用。Gli和TEA组舒张血管程度比顺铂组低,差异有统计学意义（P<0.05）。13.Rho激动剂AngⅡ(1×10^-7mol/L)孵育血管后,顺铂的舒张作用部分被抑制（P<0.01）,而Rho抑制剂fasudil（3×10^-88 mol/L）孵育血管后,顺铂的舒张作用增强（P<0.05）。14.顺铂可促进大鼠胸主动脉血管环产生NO。与顺铂组相比,加入Rho抑制剂fasudil,血管中NO的释放量增加（P<0.05）,而加入Rho激动剂AngⅡ后,血管中NO的释放量有所下降（P<0.05）。15.顺铂可使大鼠胸主动脉血管组织中eNOS蛋白水平增加（P<0.05）,而iNOS蛋白水平无明显变化。孵育Rho抑制剂会使eNOS蛋白水平升高（P<0.01）,iNOS蛋白水平无变化;而孵育Rho激动剂则使eNOS蛋白水平下降（P<0.01）,iNOS蛋白水平无影响。结论:1.顺铂可舒张大鼠离体胸主动脉环,其舒张作用与血管内皮功能密切相关。2.顺铂舒张血管的作用可被NO合酶抑制剂抑制,说明其舒张血管作用有可能是通过影响内皮NO而产生。3.顺铂可通过影响PKC对NO的作用介导其抗肿瘤及舒血管作用4.顺铂的舒血管作用可能还与外钙内流、PGI₂通路、抑制K_Ca通道和K_ATP通道以及与ROCK-eNOS-NO信号通路相关。