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茉莉酸在烟草的烟碱代谢调控中发挥关键作用。为揭示茉莉酸介导烟碱代谢的分子机制,本研究分析了下游转录因子MYC2和MYB305对烟碱合成相关基因的调控作用。以前期培育的MYC2和MYB305过表达植株(MYC2-OE、MYB305-OE)和基因沉默植株(MYC2-RI、MYB305-RI)、茉莉酸受体蛋白COI1的基因沉默植株(COI1-RI)和COI1沉默植株与MYC2和MYB305过表达植株的杂交后代(COI1-RI×MYC2-OE、COI1-RI×MYB305-OE)、以及TN90对照烟草为材料,进行了茉莉酸敏感性及烟碱含量检测,分析了MYC2和MYB305对烟草茉莉酸敏感特性及烟碱合成水平的影响;检测了MYC2和MYB305转基因材料中MYC2和MYB305的表达水平、以及ERF类烟碱合成调控因子基因(ERF189、ERF168)的表达水平,以解析MYC2、MYB305间的相互表达调控及其对烟碱代谢相关ERF调控因子基因的表达调控;并检测了烟碱代谢功能基因[精氨酸脱羧酶(Arginine decarboxylase,ADC)、鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)、N-甲基腐胺转移酶(Putrescine N-methyltransferase,PMT)、喹啉酸核糖转移酶(Quinolinate phosphoribosyl transferase,QPT)]在MYC2和MYB305转基因材料中的相对表达水平,以解析MYC2、MYB305对烟碱代谢功能基因的表达调控;分析了COI1沉默植株与MYC2和MYB305过表达植株杂交材料的茉莉酸敏感性,并检测了烟碱含量及烟碱代谢功能基因的相对表达水平,以研究MYC2、MYB305对COI1沉默植株的烟碱代谢恢复作用;并对受MYC2在茉莉酸处理下负调控的ADC和ODC基因启动子进行了分子克隆及载体构建。主要研究结果如下:1.MYC2、MYB305对烟草茉莉酸敏感特性及烟碱合成水平的影响分析。结果表明:转录因子MYC2可增强烟草对茉莉酸信号的敏感性,正调控烟碱的合成;MYB305参与烟碱的合成调控,但不影响烟草的茉莉酸敏感性。2.MYC2、MYB305间的表达调控及其对烟碱代谢相关ERF调控因子基因的表达调控。结果表明:转录因子MYC2上调MYB305的表达,但转录因子MYB305不上调MYC2的表达。MYC2正向调控ERF189、ERF168的表达,MYB305参与了ERF189、ERF168的表达调控。3.MYC2、MYB305对烟碱代谢功能基因的表达调控。结果表明:MYC2和MYB305的过表达或基因沉默都会上调烟碱合成基因PMT、QPT的表达;过表达MYC2后,可以强烈抑制茉莉酸诱导的ADC、ODC表达;过表达或沉默MYB305均下调烟碱合成基因ADC、ODC的表达。4.MYC2、MYB305对COI1-RI的烟碱合成恢复特性。结果表明:过表达MYC2、MYB305不能恢复COI1-RI烟草的茉莉酸敏感性和烟碱合成水平。过表达MYC2可在一定程度上恢复COI1-RI烟草中烟碱代谢功能基因PMT、QPT的表达,不能恢复ADC、ODC的表达;过表达MYB305可在一定程度上恢复COI1-RI烟草中烟碱代谢功能基因PMT、QPT的表达,并部分恢复ADC、ODC的表达。5.ADC、ODC启动子基因融合GUS的蛋白表达载体构建。为揭示MYC2过表达抑制茉莉酸诱导ADC、ODC表达的分子机制,克隆了ADC、ODC基因的启动子,通过Gateway LR重组技术构建了其与GUS报告基因的融合表达载体,并通过叶盘转化法进行了转基因植株培育。本研究证明,MYC2和MYB305参与了烟碱代谢功能基因及调控基因的表达调控,为揭示茉莉酸途径调控烟碱合成基因的分子机制提供了理论基础;构建了ADC、ODC启动子基因融合GUS的蛋白表达载体,并培育其转基因植株,为后续的分子调控机制研究提供了材料基础。