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目的:中耳炎(otitis media)是一类以感染为主要病因,中耳黏膜损伤为主要病理表现,以进行性听力下降、耳鸣、耳痛为主要临床表现的中耳炎症性疾病,是影响中耳黏膜功能最常见的疾病。三叶因子家族(trefoil factor family,TFF)与呼吸系统关系密切,在呼吸道黏膜的保护、修复过程中具有重要意义。以往研究证实,中耳黏膜存在呼吸型黏膜上皮,但是关于TFF是否在中耳黏膜中存在表达,以及对中耳炎发病进程中发挥作用及其机制未见报道。本研究通过构建大鼠中耳炎动物模型,检测TFF1、TFF3蛋白在大鼠中耳炎疾病发展过程中的表达水平,研究TFF1、TFF3蛋白表达与中耳黏膜炎症因子表达之间的关系,探讨TFF1、TFF3蛋白在中耳炎发病机制中可能发挥的作用。研究方法:本研究分为两部分,第一部分选取同龄健康成年雄性SD大鼠25只,采用双侧听泡各注入活性50ul 3型肺炎链球菌悬液,来构建大鼠中耳炎模型。将SD大鼠随机分为5组,分别为:假手术对照组、模型2周组、模型4周组、模型8周组、模型12周组。用HE染色法观察不同时期大鼠中耳黏膜细胞形态学变化;通过免疫组织化学法和Western blot法检测TFF1、TFF3蛋白在不同时期大鼠中耳黏膜组织中的表达情况;本研究第二部分选取SD大鼠10只,随机分2组,分别为:假手术对照组、中耳炎模型组。同第一部分造模方法构建大鼠中耳炎模型,收集两组大鼠中耳黏膜组织标本,采用ELISA法检测组织中TFF1、TFF3蛋白和TNF-α、IL-6、IL-8的浓度。结果:中耳炎模型组大鼠中耳黏膜组织HE染色可见胶原纤维聚集,纤维组织增生,血管化的形成。免疫组织化学染色显示TFF1、TFF3蛋白在正常组大鼠的中耳黏膜组织中有一定表达,在中耳炎模型组大鼠的中耳黏膜组织中表达增高,并主要表达于上皮细胞和成纤维细胞的胞质中。Western blot法检测发现,与假手术对照组相比,中耳炎模型组大鼠中耳黏膜组织中TFF1、TFF3蛋白的表达量随着疾病的发展呈现先增加后在造模8周时稍下降,之后又增加的趋势,在造模12周达到高峰。ELISA检测结果发现,中耳炎模型组大鼠中耳黏膜中TFF1、TFF 3蛋白、TNF-α、IL-6、IL-8的浓度比对照组显著增高(P<0.05)。相关性分析表明,中耳炎大鼠中TFF1蛋白的水平与IL-6、IL-8的水平呈显著正相关(P<0.05),而与TNF-α的水平不相关。TFF3蛋白的水平与TNF-α、IL-6、IL-8的水平呈显著正相关(P<0.05)。结论:TFF1、TFF3蛋白在正常组大鼠的中耳黏膜组织中有表达,并在大鼠中耳炎中耳黏膜组织表达水平显著增高,同时中耳炎大鼠中TFF3蛋白与炎性因子TNF-α、IL-6、IL-8水平存在显著相关性,TFF1蛋白与IL-6、IL-8的水平存在显著相关性,TFF1与TNF-α的水平不相关。组织中TFF1、TFF3蛋白的水平可以反应大鼠中耳炎黏膜炎症的活动程度,并且对于中耳炎炎症进展具有良好的评估效能。意义:本课题通过构建大鼠中耳炎动物模型和相关的体外实验方法,首次探讨了TFF1、TFF3蛋白在大鼠中耳炎症中的表达调控的理论研究,而且明确了TFF1、TFF3蛋白作为中耳黏膜炎症中重要的调控因子,参与了中耳炎症的发生与发展,研究结果将丰富对中耳炎发病机制的理论认识,也为基于靶向中耳炎的治疗提供新思路。