论文部分内容阅读
马疱疹病毒1型(equine herpesvirus 1, EHV-1)重要特征之一是可以发生潜伏感染,病毒进入潜伏期后仅有潜伏相关转录体(Lantecy associated transcripts, LATs)发生转录。为了研究EHV-1 LATs启动子活性,确定其转录单元和EHV-16种调控蛋白对其调控作用。本研究将LAT(63)和LAT(64)潜在的启动子片段进行截短克隆,构建重组萤火虫荧光素酶报告质粒:pLAT (63)-(1-7)和pLAT (64)。将构建的重组报告质粒分别与作为内控的海肾荧光素酶重组质粒共转染RK13细胞。结果表明pLAT (63)-1萤火虫荧光素酶活性是阴性对照的2倍,具有启动子活性,其余6种重组报告质粒均没有启动子活性。pLAT (64)萤火虫荧光素酶是阴性对照的4倍,具有启动子活性;利用5’RACE和3’RACE确定EHV-1两种LATs的转录单元;将EHV-1 pLAT (63)或pLAT (64)重组报告质粒与6种调控蛋白重组质粒分别共转染RK13细胞。结果表明:IEP、EICP22、EICP27和ETIF均可上调pLAT (63)或pLAT (64)活性,ETIF对pLAT (63)上调作用最强,EICP22对pLAT (64)上调作用最强。IR2P对两组启动子均有下调作用。EICP0对pLAT (63)没有作用,对pLAT (64)有微小上调作用。EICP22与IEP协助上调pLAT (63)和pLAT (64)的活性。免疫共沉淀实验表明:EICP0、EICP27和EICP22均可与TBP发生作用从而上调启动子活性。研究结果显示:EHV-1存在两种LATs,并且调控蛋白对于pLAT (63)和pLAT (64)的调控作用存在差别,为今后LATs功能研究和潜伏感染的再激活提供理论依据和研究线索。