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林蛙油是我国特有的名贵中药材。本论文建立了林蛙油中农药残留的分析方法,并且初步研究了林蛙油的抗衰老活性成分。
第一部分建立了林蛙油中农药多残留的GC-MS/MS分析方法。
林蛙油成分复杂,基质干扰严重。通过对净化方法和检测方法的优化,本论文首次建立了林蛙油中农药多残留的GC-MS/MS分析方法,用来分析有机磷、有机氯、拟除虫菊酯、氨基甲酸酯类的农药共15种。样品用乙酸乙酯提取、florisil层析柱净化、乙酸乙酯淋洗后,经GC-MS/MS检测,用外标法进行定量。这15种农药的浓度在0.050~10.00mg/L范围内,线性关系良好,相关系数≥0.996。作0.05mg/kg、0.50mg/kg、2.00mg/kg三个水平的添加回收,平均加标回收率为81%~117%,RSD为2.4%~18.2%。方法的检测限在0.050mg/kg~2.00mg/kg范围内。此方法准确、灵敏,适用于林蛙油中农药多残留的分析。
第二部分研究了林蛙油抗衰老活性成分。
本论文首次应用了活性追踪的方法来研究林蛙油的抗衰老活性成分。选用体外过氧化脂质测定法作为抗衰老活性生物测定方法。通过研究生物测定实验条件(实验动物肝脏、肝匀浆液的浓度、过氧化反应温育时间)对实验结果的影响,最终确定将3%的猪肝匀浆液温育90min后,用硫代巴比妥酸沸水浴30min比色的方法测定过氧化脂质的生成量。
分别用丙酮、乙酸乙酯、甲醇和生理盐水提取林蛙油,测定各提取物的抗衰老活性,其中生理盐水提取物的抗衰老活性最强。研究生理盐水提取物中活性成分的性质。结果表明:其对热稳定、对酸不稳定;不能通过醇沉、离心富集;含蛋白质41%,含糖18.5%,推测活性成分为蛋白质和多糖。又对蛋白质部分进行抗衰老活性追踪。分别用硫酸铵沉淀、大孔树脂柱吸附、葡聚糖凝胶分离蛋白质,测定各部分的抗衰老活性。实验结果表明,活性成分为大孔树脂吸附物、蛋白质和多糖。
凝胶电泳测定林蛙油所含十种蛋白质的分子量,分别为:10.0kDa,12.9kDa,15.7kDa,32.1kDa,36.5kDa,53.9kDa,57.5kDa,79.5kDa,117.4kDa,133.7kDa。