川产艳山姜果实的化学成分及药理作用初探

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目的:目前,国内外对川产艳山姜果实的研究较少,应用比较局限。本论文旨在对川产艳山姜果实挥发油的化学成分进行分析,明确挥发油化学成分的种类和含量,揭示艳山姜果实挥发油中有效成分的物质基础。对川产艳山姜果实的黄酮类成分进行研究,优选适合的总黄酮含量测定方法。对总黄酮进行提取、纯化的工艺研究,对艳山姜果实黄酮类成分进行初步鉴定与含量测定,揭示艳山姜果实黄酮类有效成分的物质基础,并为艳山姜果实的质量控制提供一定的参考依据。研究川产艳山姜果实的镇痛作用,为艳山姜治疗胃脘疼痛、坐骨神经痛和风湿关节痛的新药研发提供科学依据,还可为艳山姜果实资源的进一步开发与利用提供研究基础。
  方法:①采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,GC-MS法进行分离分析,查找NIST08.LIB谱库、CAS号和参考文献确定化学成分,色谱峰面积归一化法计算百分含量。②以芦丁为对照品,采用UV-vis法估算艳山姜果实总黄酮的含量。采用回流提取法,首先进行单因素试验,考察艳山姜总黄酮含量受乙醇浓度、料液比、提取温度和提取时间四个因素的影响,优选三组水平,再运用Box-Behnken法,确定最佳的艳山姜果实总黄酮的提取工艺。③采用大孔吸附树脂法对艳山姜果实总黄酮粗提物进行纯化,考察对总黄酮的吸附率和解吸率受上样液浓度、乙醇浓度、上样量、水洗量、乙醇用量等因素的影响,确定最佳的艳山姜果实总黄酮纯化工艺。④采用UPLC-QTOF-MS/MS法对艳山姜果实黄酮类成分进行分离鉴定。采用HPLC法建立一种快速、准确可同时测定艳山姜果实中两种黄酮类单体成分金丝桃苷和异槲皮苷含量的方法。采用DPPH法和ABTS法研究艳山姜果实的体外抗氧化活性。⑤采用热板法测定小鼠在连续灌胃艳山姜果实水提物、42%醇提物、纯水和阿司匹林7天后,小鼠在最后一次给药30min、60min、90min、120min的舔后足反应时间。采用扭体法观察小鼠在连续灌胃艳山姜果实水提物、42%醇提物、纯水和阿司匹林7天后,小鼠在最后一次给药15min内扭体反应次数。
  结果:①从川产艳山姜果实挥发油中鉴定了91种化合物,占挥发油总量的93.61%。主要为萜类和芳香族化合物。主要含有β-蒎烯、柠檬烯、α-松油醇、α-蒎烯,占挥发油总量的53.4%,并首次发现川产艳山姜果实中香料成分占挥发油总量的60.85%。②建立了川产艳山姜果实总黄酮的UV- vis含量测定方法和最佳提取工艺为:乙醇浓度42%,料液比1:17(g/mL),80℃提取2.5h,得到艳山姜果实总黄酮含量约为8.4mg/g。③最适纯化川产艳山姜果实总黄酮的大孔吸附树脂为极性的NAK-9型树脂,建立了最佳的艳山姜果实总黄酮的纯化工艺为:6BV0.5mg/mL的艳山姜黄酮上样液,1mL/min吸附,31BV水用量,8BV40%乙醇以1mL/min体积流量洗脱,总黄酮的纯度由原来的8.6%升高至36.5%,纯度提高了4.2倍。④采用UPLC- QTOF-MS/MS法,快速、准确的从川产艳山姜果实中鉴定出主要含有金丝桃苷和异槲皮苷两种黄酮成分。建立的HPLC法,操作简便、结果准确,可用于同时测定川产艳山姜果实中金丝桃苷和异槲皮苷,测得川产艳山姜果实中金丝桃苷含量为21.34μg/g,异槲皮苷含量为40.67μg/g。并且艳山姜果实42%醇提物纯化前和纯化后均有体外抗氧化的活性,纯化后的抗氧化活性明显高于纯化前,纯化后的抗氧化活性和阳性药物VC相当。⑤艳山姜果实水提物高、中剂量和艳山姜果实醇提物高、中剂量均可延长热板刺激的小鼠舔后足反应时间,艳山姜果实醇提物效果优于艳山姜水提物,并呈剂量依赖性。艳山姜果实水提物高剂量组可减少醋酸致扭体反应次数。
  结论:本实验明确了川产艳山姜果实中挥发性成分的种类和含量,揭示了挥发油中有效成分的物质基础。制定了艳山姜果实总黄酮含量测定方法,操作简单、快捷。本研究优化了川产艳山姜果实总黄酮的提取工艺和纯化工艺,操作简单可行。初步鉴定了川产艳山姜果实中黄酮类成分的物质基础。建立的HPLC法,操作简便、结果准确,可用于同时测定川产艳山姜果实中金丝桃苷和异槲皮苷。艳山姜果实总黄酮纯化物具有良好的体外抗氧化活性。艳山姜果实水提物和42%醇提物均有中枢镇痛的作用,艳山姜果实水提物还具有外周镇痛的作用。本次研究可为艳山姜果实制定含量测定的质量标准提供一定的参考价值,并且有益于艳山姜果实药用植物资源的进一步开发与利用。
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