类猪圆环病毒P1是从临床疑似猪断奶后多系统衰竭综合征(Postweaning mμLtisystemic wasting syndrome,PMWS)病猪的血清中分离到的环状、单股、负链DNA病毒,全长648个核苷酸,是目前发现的基因组最小的动物病毒,大部分核苷酸序列与猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)开放阅读框2(Openreading frame2,ORF2)的序列高度同源。P1病毒与PCV2类似,同样可导致感染猪出现类似PMWS的临床症状。本实验主要研究了类猪圆环病毒P1疫苗对PCV2是否具有交叉保护性。1、P1亚单位疫苗与核酸疫苗的制备P1病毒主要包括3个开放阅读框,ORF1为P1的结构蛋白,利用P1-ORF1作为目的基因,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ORF1,作为P1核酸疫苗;同时,利用杆状病毒表达系统获得的重组杆状病毒pFastbacTM-ORF1(本实验室保存)大量获取ORF1蛋白作为亚单位疫苗;结果,通过免疫组化和反转录实验证明了重组质粒pcDNA3.1(+)-ORF1 能在 PK-15 细胞中表达,Western Blot 结果证明:pFastbacTM-ORF1表达产物能够与抗P10RF1多抗发生特异性反应。2、动物实验24只6周龄BALB/c小鼠,分为亚单位疫苗组,核酸疫苗组,攻毒对照组和阴性对照组4组,每组6只。首免(肌肉注射)后2周加强免疫,二免2周后攻毒(腹腔注射)PCV2(AH2010-P58株,TCID50:106/mL500μL),攻毒4周后全部断颈处死,采集肺脏、脾脏、肾脏做组织切片及免疫组化实验;免疫后每两周采血一次,使用间接ELISA检测抗体;攻毒后每周称量体重分析各组平均日增重情况。3、疫苗保护性检测攻毒后,各组小鼠没有明显的临床症状。各组之间的平均日增重差异不显著;组织脏器的切片结果表明,阴性对照组无病变,P1核酸疫苗组的微观病变很轻微,而PCV2攻毒对照组和亚单位疫苗组都有较严重的病变;免疫组化结果同样表明,亚单位疫苗组与PCV2攻毒对照组的病毒阳性信号多于核酸疫苗组;血清学抗体检测结果显示,核酸疫苗组显著高于其他各组;荧光定量检测出核酸疫苗组PCV2病毒载量显著低于攻毒对照组,亚单位疫苗组与攻毒对照组差异不显著。结果表明:在小鼠模型中,P1核酸疫苗对PCV2病毒有一定的交叉保护作用,这为以后在猪机体上的研究奠定了基础。