【摘 要】
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果蝇无翅基因与小鼠int同源基因四（Wingless Integrated four,Wnt4）信号的异常激活已在伤口愈合过程和纤维化疾病的发病机制中得到证实,Wnt4被明确确定在肾、肺和肝纤维化的发病机制中具有关键作用。转化生长因子-β1（Transforming growth factor-beta1,TGF-β1）能直接促进组织中成纤维细胞Wnt4的表达。然而,Wnt4在TGF-β1诱导的口
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果蝇无翅基因与小鼠int同源基因四（Wingless Integrated four,Wnt4）信号的异常激活已在伤口愈合过程和纤维化疾病的发病机制中得到证实,Wnt4被明确确定在肾、肺和肝纤维化的发病机制中具有关键作用。转化生长因子-β1（Transforming growth factor-beta1,TGF-β1）能直接促进组织中成纤维细胞Wnt4的表达。然而,Wnt4在TGF-β1诱导的口腔黏膜肌成纤维细胞（Myofibroblasts,MGF）的转化和增生性瘢痕形成中的具体作用仍不清楚。目的:本实验通过体外模拟牙龈瘢痕的形成,探讨Wnt4对牙龈肌成纤维细胞分化的抑制作用,可能提供了一种治疗和预防口内黏膜瘢痕的新治疗策略。方法:取正常口内牙龈组织及口内咀嚼黏膜瘢痕组织,提取RNA,q RT-PCR检测正常口内软组织及口内咀嚼黏膜瘢痕组织中Wnt4及α-SMA的含量比较;组织块培养法获取人牙龈成纤维细胞（Gingival fibroblast,GF）并采用免疫荧光法及扫描电镜鉴定细胞性质;TGF-β1诱导建立人牙龈肌成纤维细胞过表达模型以模拟瘢痕组织,分3组,即对照组,TGF-β1组,TGF-β1+Wnt4抑制剂组,通过RT-PCR及WB方法检测α-SMA表达情况并探索Wnt4少量表达对MGF分化的影响;筛选出干扰效率最高的Wnt4si-RNA组,通过RT-PCR及WB方法检测α-SMA表达情况并探索Wnt4不表达对MGF分化的影响以探索肌成纤维细胞的去分化能力,以上试验数据分析使用Graph Pad8.0软件系统完成处理;结果:正常口内牙龈组织及口内咀嚼黏膜瘢痕组织相比,瘢痕组织胞内Wnt4及α-SMA含量较正常组织高;组织块培养5～8 d时,细胞以放射形的方式从组织块中游离出来,15天后,大约90%的细胞覆盖了整个容器的底部,扫描电镜下,细胞胞体大,多为星形或梭形,免疫荧光实验显示细胞抗波形蛋白及α-SMA阳性。Wnt4抑制剂及Wnt4 si-RNA作用于MGF过表达模型后,RT-PCR及WB示:与对照组相比,经TGF-β1诱导后建立的MGF过分化模型其α-SMA基因的表达水平显著上调（P＜0.05）,而经Wnt4抑制剂及Wnt4 si-RNA处理的MGF过分化模型其α-SMA基因的表达水平不同程度被抑制（P＜0.05）。结论:口内咀嚼黏膜瘢痕组织Wnt4及α-SMA表达量较正常粘膜组织高,组织块培养法可获得充足的细胞可验证为GF,TGF-β1可诱导MGF分化模型以模拟瘢痕形成,而Wnt4可抑制由TGF-β1诱导的MGF的分化,且可降低MGF的收缩活性。
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