目的： 粪便污染水源会给人类带来巨大潜在威胁，传统的水体监测只能对水体做出卫生学评价，无法查找污染来源。抗生素敏感性微生物源追踪技术则可以根据水中不同来源特异指标物对不同浓度抗生素的敏感性不同，结合统计方法查找水体中粪便污染来源。本次研究旨在筛选适当抗生素及其不同浓度，建立桂五水库地区微生物源追踪已知源数据库，并应用正确归类率等指标对其进行评价，监测桂五水库水样标本，追踪水中粪便污染来源。 方法： 采集桂五水库周边全部5个村落中已知来源（人、家畜、家禽等）的新鲜粪便标本，通过MFC和EC-MUG培养基分离确认指示菌E．coli。配制含不同浓度抗生素的TSA平板，将E．coli印至含抗生素的TSA平板，根据E．coli在不同浓度TSA平板生长得分筛选抗生素及其不同浓度。记录已知来源的E．coli抗生素平板生长得分，建立已知源微生物源追踪数据库。应用逐步选择判别分析建立不同物种最佳判别式，利用正确归类率和已知来源菌株对已知源数据库进行评价。按月份采集桂五水库水样，膜过滤法分离指示菌，进行抗生素敏感性实验，将实验结果代入构建的最佳判别式，得出桂五水库中粪便污染来源。 结果： （1）本次研究中筛选九种抗生素及其35种不同浓度，分别为新霉素0．25、0．5、0．75、1μg/ml，环丙沙星0．25、0．5、1μg/ml，链霉素1、2、3、5μg/ml，头孢拉丁5、7．5、10、12．5、15μg/ml，氟苯尼考5、7．5、10、15μg/ml，利福平7．5、10、15、20μg/ml，青霉素G20、40、80μg/ml，红霉素15、17．5、25、35μg/ml，四环素5、10、20、30μg/ml。 （2）最终建立的已知源抗生素敏感性数据库包含1954株E．coli，逐步选择判别分析对数据库分析显示：二分类（人、动物）时正确归类率为88．59％，三分类（人、家畜和家禽）时正确归类率为84．98％，八种动物分类时正确归类率为80．62％，全部九种来源正确归类率为76．71％。 （3）水样分析结果显示：桂五水库中主要粪便污染来源为人、羊和猪。 结论： 本研究筛选了合适的抗生素，建立了抗生素敏感性微生物源追踪方法，水样标本监测显示桂五水库主要的粪便污染来源为人、羊和猪，应加强桂五水库周边地区厕所及家畜废弃物的管理。