论文部分内容阅读
干扰素是由不同细胞产生的可溶性糖蛋白，具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能。Ⅰ型干扰素中的干扰素-α因具有很强的抗病毒活性而被用于治疗慢性乙肝和丙肝感染。干扰素治疗中最大的缺点是具有极短的半衰期，这就降低了干扰素的药效和生物利用性。目前，提高干扰素半衰期的方法是采用聚乙二醇对干扰素-α2进行蛋白修饰。由Bolder Biotechnology, nc生物技术公司构建的含有干扰素-α基因的质粒转化进大肠杆菌W3110，IPTG诱导后经SDS-PAGE分析，表达产物的分子量为19KDa左右，并且蛋白以不溶性的包涵体形式存在。利用超声破碎对菌体细胞进行破碎可以提取包涵体，使用6mol/L盐酸胍对包涵体进行溶解变性，变性蛋白缓缓注入复性溶液稀释20倍，4℃静置48h后即可复性。采用疏水相互作用层析分离重组人干扰素-α2b，去除干扰素样品中的二聚体，得到高纯度的干扰素用于进一步的研究。首先采用阳离子交换层析纯化复性重组人干扰素-α2b，去除了大部分的杂蛋白，然后采用疏水相互作用层析纯化重组人干扰素-α2b，去除复性过程中产生的错误折叠体和二聚体，并考察盐浓度、pH值、流速和洗脱液中尿素对疏水相互作用层析纯化效果的影响。最终确定硫酸铵初始浓度1.2mol/L、缓冲液pH值6.0、流速2.5mL/min、洗脱液中添加尿素浓度为2mol/L时疏水相互作用层析纯化效果最佳。最终得到的重组人干扰素-α2b非还原型SDS-PAGE电泳均呈单一条带。本文确定了疏水层析纯化重组人干扰素-α2b的最优条件，成功提取到具有高活性、高纯度的重组人干扰素-α2b纯品，样品回收率达到63.07%。