猪胸膜肺炎放线杆菌亚单位成分的制备、免疫原性研究及型特异性间接ELISA方法的建立

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猪传染性胸膜肺炎(Porcine Pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumoniae, APP)引起的一种常见的呼吸道传染病,各年龄的猪只均可感染。猪群感染胸膜肺炎放线杆菌后,当遇到气候环境突变,通风不良等应激因素时,猪只抵抗力下降,可诱发本病,主要表现为精神沉郁,体温升高,呼吸困难等临床症状,并出现特征性的出血性肺炎和胸膜炎。本病在世界各养猪国家普遍存在,近年来,流行日趋严重,成为大规模养猪的五大疫病之一。本研究共分为四部分:第一部分:猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白的分型及对小鼠的免疫原性研究制备1-12个血清型胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜蛋白(OMP),通过SDS-PAGE蛋白质电泳,将12个血清型的外膜蛋白分为6个型,以该外膜蛋白免疫小白鼠,进行同源攻毒保护试验,结果OMP在16μg/只的免疫剂量下可对小白鼠产生较强的保护作用,用同血清型菌株对免疫后的小白鼠攻毒,仅表现肺脏轻微出血,无死亡,而对照组未经免疫直接攻毒的小白鼠全部死亡,肺脏严重出血;小白鼠免疫后第2d就可以检测到抗体,并且抗体水平上升较快,到第6d抗体达到最高水平,之后,抗体水平开始下降,但下降幅度不大,可持续2个月左右;交叉保护试验结果表明血清3型和4型OMP对血清5型APP没有保护作用,免疫后的小白鼠攻毒仍表现多数死亡;其他血清型之间有交叉保护作用,免疫后的小白鼠攻毒无死亡,仅表现肺脏有不同程度的出血。上述结果表明OMP是猪传染性胸膜肺炎病的主要免疫保护性抗原之一,该研究为APP亚单位疫苗的研制及应用提供了理论依据。第二部分:猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖的制备及对小鼠的免疫保护作用
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