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[背景]物质滥用已然成为全球性的社会问题,不但严重影响群体的健康,也对社会公共安全产生威胁,相关的禁毒及戒毒工作已经成为现阶段各国政府都需要积极面对的重大问题和艰巨任务。甲基苯丙胺（MA,俗称“冰毒”）为代表的新型合成类毒品的出现更是进一步加剧了物质滥用的蔓延。国内外的流行病学研究均发现MA滥用人群的年龄结构有明显的年轻化趋势。第一部分 甲基苯丙胺对大鼠勃起功能影响的研究[目的]通过构建雄性大鼠的MA暴露模型,从HIF-1 α/A2bR/PI3K/PKBα/eNOS/cGMP信号通路和COX-2/PTGIS/cAMP信号通路来探讨MA暴露在急性期、慢性期和戒断后对雄性大鼠阴茎勃起功能的影响及可能机制。[方 法]1.将50只雄性大鼠随机分为5组:对照组（急性对照、慢性对照）、MA组（急性MA、慢性MA）和戒断组。MA组和戒断组的大鼠定期接受腹腔内注射MA溶液;戒断组在终末期10天内停药;对照组的大鼠同期接受腹腔内注射相同容量的生理盐水。2.定期用观察自发性勃起和BR的方法来评估各组大鼠的阴茎勃起功能。3.ELISA法测定血清中8-OhdG的水平;ELISA法测定阴茎海绵体组织中NOS、cGMP和cAMP的水平。4.RT-qPCR法检测阴茎海绵体组织中HIF-1α、A2bR、eNOS、COX-2和PTGIS的mRNA表达水平;Western-blot法检测阴茎海绵体组织中HIF-1α、A2bR、PI3K、p-PKBα、p-eNOS、COX-2 和 PTGIS 的蛋白表达水平。[结 果]1.成功构建急、慢性MA暴露及戒断的雄性大鼠模型。2.与急性对照组比较,急性MA组的勃起功能显著增强;与慢性对照组比较,慢性MA组的勃起功能显著减弱,戒断组的勃起功能无显著性差异。3.HIF-1 α/A2bR/PI3K/PKBα/eNOS/cGMP 信号通路:（1）急性MA组与急性对照组相比,ELISA法检测8-OhdG、NOS和cGMP的水平显著升高,HIF-1α、A2bR和eNOS的mRNA表达水平显著升高,HIF-1α、A2bR、PI3K、p-PKBα和p-eNOS的蛋白表达水平显著升高。（2）慢性MA组与慢性对照组相比,ELISA法检测8-OhdG、NOS和cGMP浓度显著降低,HIF-1 α的mRNA和蛋白表达无显著差异,但A2bR和eNOS的mRNA表达水平显著降低,A2bR、PI3K、p-PKBα和p-eNOS的蛋白表达水平显著降低。（3）戒断组与慢性对照组相比,ELISA法检测8-OhdG、NOS和cGMP浓度无统计学差异,HIF-1α、A2bR和eNOS的mRNA表达水平无显著差异,HIF-1α、A2bR、PI3K、p-PKBα和p-eNOS的蛋白表达水平无显著差异。4.COX-2/PTGIS/cAMP 信号通路（1）急性MA组与急性对照组相比,COX-2和PTGIS的mRNA和蛋白表达水平显著升高,ELISA法检测cAMP的水平显著升高。（2）慢性MA组与慢性对照组相比,COX-2和PTGIS的mRNA和蛋白表达水平显著降低,ELISA法检测cAMP的水平显著降低。（3）戒断组与慢性对照组相比,COX-2和PTGIS的mRNA和蛋白表达水平无显著差异,ELISA法检测的cAMP水平无显著差异。[结 论]1.可以通过腹腔注射的方式构建急、慢性MA暴露及戒断的大鼠模型,并研究其勃起功能。2.急性MA暴露后勃起功能增强,慢性MA暴露后勃起功能受损,但在戒断后勃起功能可以恢复。3.MA暴露可能通过HIF-1α/A2bR/PI3K/PKB α/eNOS/cGMP信号通路来影响大鼠的勃起功能:急性MA暴露可以增加氧化应激,使8-OHdG水平显著升高,激活HIF-1α/A2bR/PI3K/PKBα/eNOS/cGMP信号通路的表达上调,增强勃起功能;慢性MA暴露可以增加氧化应激,使8-OHdG水平显著升高,虽然HIF-1α的表达无显著变化,但下游的A2bR/PI3K/PKBα/eNOS/cGMP信号通路的表达均下调,抑制勃起功能;在戒断后,氧化应激消失,HIF-1α/A2bR/PI3K/PKBα/eNOS/cGMP信号通路的表达和阴茎勃起功能可以恢复至对照组水平。4.MA暴露可能通过的COX-2/PTGIS/cAMP信号通路来影响大鼠勃起功能:急性MA暴露可以上调COX-2/PTGIS/cAMP信号通路的表达,增强勃起功能;慢性MA暴露可以下调COX-2/PTGIS/cAMP信号通路的表达,抑制勃起功能;在戒断后,COX-2/PTGIS/cAMP信号通路的表达和阴茎勃起功能可以恢复至对照组水平。第二部分 慢性甲基苯丙胺暴露对非人类灵长类HPT轴功能影响的研究[目 的]通过构建非人灵长类MA慢性暴露的动物模型,从内分泌激素水平和靶器官分子生物学角度探讨MA慢性暴露对HPT轴和HPA轴的功能影响及可能损害。[方 法]1.将10只成年雄性猴子分为2组,即对照组（生理盐水）和MA组（MA生理盐水溶液）,以逐渐增加的剂量注射生理盐水或者MA生理盐水溶液4周,随后维持剂量注射24周。2.每周收集和检测血液样本中甲状腺和肾上腺相关激素的水平。3.使用RT-qPCR和Western-blot技术来检测:甲状腺中Bcl-2、Bax和TSH-R的mRNA和蛋白表达水平;肾上腺皮质组织中Bcl-2、Bax和ACTH-R受体的mRNA和蛋白表达水平。[结 果]1.成功构建慢性MA暴露的非人类灵长类动物模型。2.与对照组相比,MA组的T4、FT4、T3、TSH、ACTH和皮质醇水平显着升高,但FT3、TGAb、TPOAb和醛固酮的水平无显着差异。3.与对照组相比,MA组的大多数甲状腺表现示出明显的紊乱结构,腺泡大小不一,伴有淋巴细胞浸润和局部纤维化。4.与对照组相比,MA组的甲状腺组织中,Bcl-2和TSH-R的mRNA和蛋白表达水平显著降低,Bax的mRNA和蛋白表达水平显著升高。5.与对照组相比,MA组的肾上腺皮质中,Bcl-2和ACTH-R的mRNA和蛋白表达水平显著降低,Bax的mRNA和蛋白表达水平显著升高。[结 论]1.可以通过静脉注射的方式成功构建非人灵长类慢性MA暴露的动物模型。2.在非人灵长类动物模型中,长期MA滥用可以改变了 HPT轴和HPA轴的功能。3.在非人灵长类动物模型中,长期MA滥用可以使甲状腺组织表现出明显的组织学微观结构紊乱,肾上腺组织则没有上述类似的变化。4.在非人灵长类动物模型中,长期MA滥用可以使甲状腺和肾上腺皮质组织中抗凋亡基因Bcl-2的表达减少,而促凋亡基因Bax的表达增加,从而有可能诱导甲状腺和肾上腺皮质细胞的凋亡或者微观损伤,最终导致HPT轴和HPA轴功能的改变。