甜菜丛根病抗性差异性状及蛋白组学研究

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甜菜丛根病是影响甜菜生产的严重病害,能够导致甜菜产量剧减和含糖量降低。本研究首次以国内自育抗性材料为研究对象,开展了丛根病抗性相关机理研究,之前未有相关报道。本文对76份不同类型的甜菜育种材料进行了丛根病抗性鉴定比较试验;比较了3种不同蛋白质提取方法,优化了甜菜双向电泳体系条件;比较了病毒胁迫处理和未处理材料不同时期抗性酶的酶活变化;双向电泳后,抠除抗病和感病材料明显差异的蛋白质胶点,送华大基因公司进行胶内蛋白质鉴定分析。研究结果如下:(1)不同类型的育种材料丛根病抗性田间鉴定比较试验,在抗性材料中筛选出了5个抗性表现良好的材料。其中HBI-1和N98122为高抗材料。筛选出HBX-5和IX-1作为高感材料。在后续试验中分别作为抗病和感病材料使用。在引进材料、高糖型材料、标准型材料中分别筛选出3、2、2个表现较好的材料。(2)甜菜双向电泳体系条件优化研究中:3种蛋白质提取方法中TCA/丙酮法提取效果较好,IPG胶条pH范围47较适合甜菜叶片双向电泳,7 cm IPG胶条150μg上样量效果较好。17 cm IPG胶条300μg上样量效果较好。(3)病毒胁迫处理后抗病材料较感病材料各项酶活性均有所增加,但应激反应后酶活的峰值日期并不相同,峰值日期大多出现在苗龄45 d(侵染初期),而过氧化物酶峰值日期为苗龄50 d,说明不同酶在应激反应中基因表达的速度并不相同。未经胁迫处理的试验材料酶活变化幅度较小。(4)抗感病材料田间产质量鉴定结果表明,丛根病抗性材料抗1(HBI-1)、抗2(N98122)含糖率均高于对照,块根亩产量抗1(HBI-1)略低于对照,抗2(N98122)高于对照。产糖量均高于对照。综合表现抗1(HBI-1)较抗2(N98122)表现更好。感病材料病3(HBX-5)、病4(IX-1)块根产量和含糖率均低于对照。(5)蛋白质双向电泳后,扣除明显差异的蛋白点78个,共检测到169个蛋白。其中有25个蛋白质仅在感病材料检测到,111个蛋白质仅在抗性材料中检测到。同时在抗1和抗2样品中检测到13个蛋白质,仅在抗1样品中检测到的蛋白质28个、仅在抗2样品检测到蛋白质70个。通过基因注释和通路分析,注释到72个KO,114个通路。对145个蛋白进行GO注释,共注释到208个GO注释。其中134个蛋白可以注释上NR数据库。通过数据库比对分析。抗病材料主要表达的功能蛋白,以光合作用、糖代谢、呼吸抗氧化作用、信号转导、脂代谢及一些未知蛋白为主;而感病材料主要表达光合作用蛋白和呼吸抗氧化蛋白,即自身应激反应所表达的蛋白质。其中抗2材料中发现一个蛋白质序列(Bv7171670jfwy.t1),推断可能是蛋白质At1g52660,与植物抗病性有一定的相关性。
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