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研究背景与目的在小鼠中所进行的研究表明ANGPTL8是调节血甘油三酯(triglycerides,TG)水平的关键蛋白。因为与野生型小鼠相比,ANGPTL8-/-小鼠的血TG水平下降约70%,而血糖、胰岛素等糖代谢相关指标并无显著差异。然而,有多项研究发现在2型糖尿病患者中血ANGPTL8水平明显升高。为了探讨ANGPTL8在糖脂代谢中的作用,本研究检测了不同糖/脂代谢状态下(包括健康对照组、单纯高血糖组、单纯血脂异常组以及高血糖合并血脂异常组)人群中血ANGPTL8的水平并分析其与糖脂代谢之间的相关性。方法我们分别纳入了中国2型糖尿病患者肿瘤发生风险的流行病学研究(the Risk Evaluation of c Ancers in Chinese diabe Tic Individuals:a l ONgitudinal study,REACTION)中年龄、性别、体重指数等相关指标相匹配的正常对照人群(n=92)、单纯高血糖人群(n=87,空腹血糖≥7 mmol/l)、单纯血脂异常人群(n=86,TG≥2.0 mmol/l或/和HDL≤0.9 mmol/l)和高血糖合并血脂异常人群(n=99,空腹血糖≥7 mmol/l+TG≥2.0 mmol/l或/和HDL≤0.9 mmol/l)进行研究分析。所有研究对象血清中ANGPTL8的水平采用ELISA进行测定。结果在健康对照、单纯高血糖、单纯血脂异常以及高血糖合并血脂异常四组人群中,血清ANGPTL8水平有逐渐升高趋势。与健康对照组相比,ANGPTL8水平在单纯血脂异常组显著升高(P<0.05),而在高血糖合并血脂异常组的升高更为明显(P<0.01)。在对与糖代谢相关相关指标的分析中观察到,ANGPTL8与空腹血糖(r=0.113,P<0.05),甘油三酯血糖指数(triglycerides and glucose index,Ty G指数)(r=0.194,P<0.01)呈正相关。在校正性别、年龄、血TG和总胆固醇(total cholesterol,TC)等因素后,ANGPTL8与空腹血糖(partial r=0.154,P<0.01)、糖化血红蛋白(Hb A1c)(partial r=0.110,P<0.05)和Ty G指数(partial r=0.224,P<0.01)呈正相关。在对与脂代谢相关指标的分析中发现,ANGPTL8与TG(r=0.161,P<0.01)、TC(r=0.149,P<0.01)、TG/HDL(r=0.143,P<0.01)、nonHDL/HDL(r=0.120,P<0.05)呈正相关。在校正性别、年龄、空腹血糖后,ANGPTL8与TG(partial r=0.163,P<0.01)、TG/HDL(partial r=0.147,P<0.01)、non-HDL/HDL(partial r=0.134,P<0.05)呈正相关。结论循环中ANGPTL8的水平在单纯性脂质代谢异常时明显升高,而在高血糖合并血脂异常人群中的升高更为明显,这表明ANGPTL8与糖脂代谢异常关系密切,可能是导致糖脂代谢异常相互影响的重要蛋白。研究背景与目的ANGPTL8是一种主要由肝脏分泌的通过抑制脂蛋白脂肪酶(lipoprteinlipase,LPL)活性调节脂代谢的蛋白。第一部分的研究结果显示在高血糖合并血脂异常的人群循环中ANGPTL8的水平明显升高,可能是导致糖脂代谢异常相互影响的重要蛋白。而胰岛素抵抗在糖脂代谢异常相互影响的过程中起重要作用。那么为了探索ANGPTL8与胰岛素抵抗的关系,本研究主要探讨胰岛素抵抗及高浓度胰岛素对ANGPTL8表达的调节作用及相关机制。方法为了建立胰岛素抵抗模型,我们分别使用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)(4 ng/ml)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)(20 ng/ml)、地塞米松(1μM)、棕榈酸(500μM)、高糖(33 m M)及高浓度胰岛素(10-6 M)干预人正常肝细胞系(L02)24小时,通过检测在这些细胞模型中ANGPTL8的水平来观察胰岛素抵抗及以及造成胰岛素抵抗的各种因子对ANGPTL8表达的调节作用。使用胰岛素通路PI3K/Akt的抑制剂(LY294002和MK-2206)和MAPK/ERK的抑制剂(U0126)及PI3K/Akt通路激动剂(IGF-1)探究胰岛素阻断胰岛素信号通路对ANGPTL8的表达的影响。另外,通过对小鼠皮下注射胰岛素及采用二甲双胍对糖尿病小鼠进行灌胃,观察胰岛素及胰岛素抵抗对ANGPTL8表达的影响。最后,收集两组年龄、性别、血脂水平和口服药相匹配,使用或未用胰岛素治疗的2型糖尿病患者血标本,进一步验证胰岛素对ANGPTL8的调节作用。结果与对照组相比,在6种胰岛素抵抗模型中仅高胰岛素干预组细胞分泌的ANGPTL8水平明显升高(P<0.01)。使用高胰岛素分别联合TNF-α、IL-1β、地塞米松、棕榈酸、高糖干预细胞后,胰岛素促进ANGPTL8表达的作用被抑制。这一结果表明是高胰岛素本身促进ANGPTL8的表达,而胰岛素抵抗减弱了这一效应。使用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002和MK2206能完全抑制高胰岛素上调ANGPTL8表达的作用(P<0.01)。而PI3K/Akt通路激动剂IGF-1同样能上调ANGPTL8的表达(P<0.05),且这一效应也能被LY294002抑制(P<0.01)。这表明胰岛素能通过激活PI3K/Akt通路来促进ANGPTL8的表达,而胰岛素抵抗通过抑制该通路来减少或抑制ANGPTL8表达。在动物实验中,皮下注射胰岛素同样上调小鼠血清ANGPTL8的表达(P<0.05)。同样,采用二甲双胍治疗能减轻糖尿病小鼠的胰岛素抵抗程度,也能使得血清ANGPTL8的水平上升(P<0.05)。在小鼠体内实验中所获得的结果与体外细胞实验的结果完全一致。最后,人群研究发现,与未使用胰岛素治疗的患者相比,外源性胰岛素治疗的患者中循环ANGPTL8的水平升高(P<0.05),进一步证明了胰岛素促进ANGPTL8表达的作用。结论高浓度胰岛素通过激动PI3K/Akt通路促进ANGPTL8的表达,而胰岛素抵抗通过抑制这一通路作用起相反作用。研究背景与目的ANGPTL8是一种新发现的主要由小鼠肝脏分泌的通过抑制脂蛋白脂肪酶(lipoprteinlipase,LPL)活性而升高血甘油三酯(triglycerides,TG)水平的蛋白。而血TG的升高是引起肝脏胰岛素抵抗、脂质沉积以及炎症通路激活,从而导致非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)发生发展的重要诱因之一。因此,ANGPTL8可能是导致NAFLD发生的重要蛋白。目前,ANGPTL8在肝脏细胞脂代谢中的作用尚不明确。本研究主要利用小鼠肝细胞NAFLD模型探讨ANGPTL8在NAFLD发生发展中的作用。方法我们使用包装ANGPTL8质粒的慢病毒感染小鼠肝细胞(AML-12),建立稳定过表达ANGPTL8的肝细胞系。使用棕榈酸(125μM)干预小鼠肝细胞18小时,建立NAFLD细胞模型。通过检测和比较过表达ANGPTL8的NAFLD细胞和对照NAFLD细胞内的TG水平、胰岛素抵抗程度及炎症因子表达,探讨ANGPTL8在小鼠NAFLD发生发展中的作用。结果与阴性对照组相比,肝细胞在感染包装ANGPTL8质粒的慢病毒96小时后,ANGPTL8的表达显著上调(P<0.05),同时胞内TG水平明显升高(P<0.05)。表明ANGPTL8促进肝细胞TG的沉积。利用棕榈酸干预肝细胞建立NAFLD模型后发现与单纯NAFLD细胞模型相比,过表达ANGPTL8的NAFLD细胞模型细胞内脂滴增多更为明显,胞内TG含量的升高也更为显著(P<0.05)。但是,两组之间胰岛素抵抗程度和炎症因子水平没有显著差异(P>0.05)。表明ANGPTL8促进NAFLD发生发展过程中肝细胞的脂质沉积,但是对胰岛素抵抗和炎症产生的作用不显著。结论ANGPTL8促进肝细胞TG沉积,促进NAFLD的发生发展。