毛竹叶黄酮碳苷提取纯化工艺研究

来源 :中国林业科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lizhiguo518
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活性天然产物成分逐渐成为研究热点,开发有潜力的活性天然产物成分是现代医药发展中的一个重要组成部分。竹子具有丰富的次生代谢产物,其中以竹叶黄酮研究为代表,具有抗氧化、抗炎、调节血脂和血糖等生物活性。我国竹类资源丰富,特别是毛竹,是我国现有竹类资源中分布面积最广、资源量最多的竹种。本研究以毛竹为研究对象,建立了竹叶中四种主要黄酮碳苷(荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷)的高效液相色谱测定方法,并对检测方法加以评估;对竹叶黄酮碳苷的提取、纯化工艺进行优化,制备以四种黄酮碳苷为主要成分的竹叶提取物,取得如下结果:(1)通过HPLC建立四种黄酮碳苷(荭草苷、异荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷)的检测方法。Waters Xterra MS C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.5%甲酸/水溶液(v/v)为流动相,流速1mL·min-1,柱温设为30℃,360nm下等梯度洗脱,四种黄酮碳苷在22min内得到有效分离。试验分别从灵敏度、精密度、重现性、稳定性和回收率五个方面评价检测方法,该方法快速、可靠,适用于大批量竹叶黄酮碳苷含量的测定。(2)采用热回流提取,通过单因素试验和正交试验对毛竹叶四种黄酮碳苷为主要有效成分的提取工艺进行优化,分析得到对得率影响大小的顺序为:乙醇浓度>提取时间>料液比>提取温度,其中乙醇浓度为极显著影响因素。同时考察提取次数对四种黄酮碳苷得率的影响,则适宜提取工艺为:75%乙醇、料液比1:20、70℃提取2h,重复提取4次。在此条件下,四种黄酮碳苷总量相对于竹叶样品的提取量为4.457mg·g-1,四种黄酮碳苷在竹叶黄酮粗提物中的纯度达15.372mg·g-1。(3)筛选合适大孔树脂型号对上述粗提物进行纯化,结果表明,D101大孔树脂的分离纯化效果较佳,样品初始浓度为10mg·mL-1,15%乙醇溶液初步洗脱除杂,收集60%乙醇洗脱液,洗脱液体积为3BV(柱床体积,Bed Volumn),洗脱速率为4BV·h-1。在此条件下,四种黄酮碳苷在纯化后的竹叶黄酮干粉中的纯度达68.359mg·g-1。(4)通过比较不同粒径范围的聚酰胺树脂的纯化效果,选择粒径范围为0.15~0.25mm的聚酰胺树脂对上述大孔树脂纯化后得到的竹叶黄酮干粉继续纯化为佳,40%乙醇溶液对四种黄酮碳苷的解吸率比较高。四种黄酮碳苷在聚酰胺纯化后的竹叶黄酮粉中的纯度达76.939mg·g-1。本文建立了四种黄酮碳苷的HPLC检测方法,并对样品进行定量分析,同时对毛竹叶中黄酮碳苷的提取、纯化工艺进行优化,得到以碳苷为主要成分的竹叶提取物。该研究结果可为竹叶黄酮碳苷的制备和功能产品的开发奠定一定的研究基础。
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