目的:在糖酵解代谢途径中研究高迁移率族蛋白1(high-mobility group A1,HMGA1)对T47D细胞糖酵解代谢的影响,探索其可能的致病机制。方法:以体外培养的T47D细胞株为研究对象,实验分为三组:HMGA1高表达为HMGA1组,空载体pcDNA3.1组及脂质体T47D组。具体如下:1.首先把HMGA1基因高表达质粒通过脂质体法转染T47D细胞系细胞。2.通过蛋白质免疫印迹法分析T47D细胞内HMGA1对己糖激酶(HK)、丙酮酸脱氢酶(PDH)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDHK)、磷酸果糖激酶(PFK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙酮酸激酶(PK)表达的差异。3.通过相应的试剂盒方法检测T47D、pcDNA3.1、HMGA1这三组T47D细胞内乳酸的累积、葡萄糖的消耗和ATP的生成的不同来进一步探讨HMGA1对糖酵解的影响。4.通过对糖酵解关键酶HK、PK、PFK、PDHK、LDH、PDH活性进行测定,来确定HMGA1对糖酵解途径的影响。5.通过G418筛选出稳定转染株后,进行MTT检测及细胞克隆形成试验检测HMGA1对细胞存活和生长的影响。结果:1.蛋白质免疫印迹法示:己糖激酶(HK2)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDHK)、磷酸果糖激酶(PFKP、PFKL)、乳酸脱氢酶(LDHA)、丙酮酸激酶(PKM2)这7种糖酵解的关键酶表达增加,丙酮酸脱氢酶(PDH)的表达却下降,而HK1、PKM1/2表达未见明显变化。2.检测结果显示在T47D人乳腺癌细胞中,葡萄糖消耗量、乳酸累积量、ATP生成量在HMGA1高表达组中成增多趋势。3.检测T47D细胞内糖酵解酶的活性结果提示:PKM、HK、LDH、PFK、PDHK这5种关键酶在HMGA1组中表达增加。4.通过对pcDNA3.1组及HMGA1组细胞进行MTT检测及细胞平板克隆实验,发现HMGA1可促进T47D乳腺癌细胞增殖。结论:1.HMGA1可通过上调糖酵解途径中的HK2、PDHK、PFKP、PFKL、LDH、PKM2关键酶的表达来促进T47D细胞的糖酵解代谢过程。2.HMGA1可促进乳腺癌T47D细胞的体外增殖及克隆能力。