YT521-B与DYTHDF对果蝇胚胎发育影响的初步研究

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调控果蝇胚胎发育的基因一直在不断的研究当中。近年来研究表明,与m6A有关的基因可以参与调控果蝇的胚胎发育。研究中显示,有关m6A阅读蛋白参与MZT(母体到合子转化期)即胚胎发育的调控。根据在哺乳动物中的研究结果,找出在进化上高度保守且在果蝇体内同源的基因,YT521-B参与m6A修饰后m RNA的剪接。DYTHDF参与的过程可以促进m6A修饰的m RNA的翻译效率提升。本文主要对m6A阅读蛋白YT521-B和d YTHDF两个含有YTH结构域的基因在果蝇早期中的功能进行研究。1.对CRISPR/Cas9果蝇通过显微注射sg RNA分别获得两个阅读蛋白基因敲除的突变体果蝇d YTHDF ~1/TM3,d YTHDF ~2/TM3,YT521-B ~1/TM3,YT521-B ~2/TM3四个品系。并通过品系之间的两两的杂交除去遗传背景,获得双突变果蝇YT521-B ~1/YT521-B ~2,d YTHDF ~1/d YTHDF ~2。2.纯化了基因部分片段原核表达蛋白,并送去制作抗体,用来检测所制备基因突变体果蝇是否完全基因敲除。进一步验证了突变体果蝇的稳定性。3.为了确定两个基因与m6A的关系,EMSA实验对两个基因的YTH Domain分别与probe A和probe m6A的m RNA探针结合情况进行检测。通过实验观察到DYTHDF的YTH结构域蛋白与probe A和probe m6A均无结合,YT521-B的YTH结构域蛋白与probe m6A能够选择性结合。4.对突变体果蝇的育性通过检测胚胎成活率进行确定,结果显示两个基因的双突变体果蝇的胚胎成活率不受母源缺失影响,在合子基因缺失的情况下成活率依然正常。综上所述,本研究证明了果蝇内与哺乳动物含有同样YTH结构域的同源基因YT521-B和d YTHDF,不影响果蝇胚胎发育。根据实验结果猜测,在果蝇体内存在其他m6A相关基因控制胚胎的发育过程。
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